【摘 要】
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目的：探索黄芩-黄连防治神经炎症的配伍优势，并基于Toll样受体4（TLR4）/髓样分化因子88（MyD88）/核转录因子-κB（NF-κB）通路，阐明黄芩-黄连配伍优势的作用特点及机制。方法：选取体外具有代表性的小鼠小胶质细胞（BV2），将BV2分为8组，分别为正常组、模型组、黄芩-黄连组、吡拉西坦组、黄芩组、黄连组；利用细菌脂多糖（LPS）建立BV2细胞炎症模型，通过细胞增殖活性检测（CCK-
【机 构】
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江西中医药大学中医脑科学研究所江西省中医药防治认知障碍脑疾病重点实验室江西省中医药管理局抑郁症中医证候动物模型重点研究室江西省中医药管理局中药药效(防治精神障碍脑疾病)评价重点研究室
【基金项目】
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江西省自然科学基金面上项目（2020BABL206142）； 国家自然科学基金项目（82060808）； 江西省卫生健康委员会科技计划项目（202131057）； 江西中医药大学首批校级科技创新团队发展计划—方证对应免疫代谢创新团队项目（CXTD22008）;江西中医药大学省级大学生创
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目的：探索黄芩-黄连防治神经炎症的配伍优势，并基于Toll样受体4（TLR4）/髓样分化因子88（MyD88）/核转录因子-κB（NF-κB）通路，阐明黄芩-黄连配伍优势的作用特点及机制。方法：选取体外具有代表性的小鼠小胶质细胞（BV2），将BV2分为8组，分别为正常组、模型组、黄芩-黄连组、吡拉西坦组、黄芩组、黄连组；利用细菌脂多糖（LPS）建立BV2细胞炎症模型，通过细胞增殖活性检测（CCK-8）试剂盒检测细胞活性；明场下观察细胞形态；酶联免疫吸附测定法（ELISA）、免疫荧光法测定药物对BV2细胞促炎因子产生及释放的影响；实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）检测TLR4、MyD88、NF-κB mRNA表达；细胞免疫荧光检测NF-κB p65核转位情况；通过TLR4信号转导抑制剂CLI-095、NF-κB阻断剂PDTC进行黄芩-黄连抗神经炎症作用靶点的确认。结果：与正常组比较，LPS诱导的模型组细胞大多处于激活状态，培养液及细胞内的IL-6、TNF-α、IL-1β含量显著升高（P＜0.01）,TLR4、MyD88、NF-κB p50及NF-κB p65的mRNA表达显著升高（P＜0.01）,NF-κB p65的入核现象明显；与模型组比较，黄芩-黄连、吡拉西坦组预处理后，BV2细胞形态大部分恢复，IL-6、TNF-α、IL-1β水平均显著降低（P＜0.01）,TLR4、MyD88、NF-κB p50及NF-κB p65 mRNA表达明显降低（P＜0.05,P＜0.01）,NF-κB p65大多存在于细胞质中；黄芩组、黄连组与模型组比较，细胞形态略有恢复，促炎因子水平及TLR4、MyD88、NF-κB p50、NF-κB p65 mRNA表达量有所降低；与黄芩-黄连组比较，黄芩组、黄连组的促炎因子抑制作用效果显著低于药对组；与模型组比较，应用信号通路特异抑制剂“黄芩-黄连+CLI-095”组、“黄芩-黄连+PDTC”组，能够明显降低TLR4、MyD88、NF-κB p50及NF-κB p65的mRNA表达（P＜0.05,P＜0.01），并明显抑制NF-κB p65转入细胞核内。结论：黄芩与黄连相须配伍后的抗神经炎症作用明显优于单味黄芩或黄连；该药对的抗神经炎症优势与抑制小胶质细胞中的TLR4/MyD88/NF-κB信号通路激活密切相关；通过验证说明TLR4、MyD88、NF-κB为黄芩-黄连发挥药对配伍优势的潜在靶点。
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