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【摘要】目的:建立夏桑菊胶囊的含量测定方法。方法:以芦丁作为对照,采用紫外分光光度法对夏桑菊胶囊中的总黄酮进行含量测定。结果:芦丁在8.12～48.72 (g/ml范围内具有良好的线性关系。平均回收率100.52%,RSD2.31%。共测七批样品,总黄酮含量72.55mg/粒。结论:该方法简便易行,重现性好,可很好的控制夏桑菊胶囊的含量
【关键词】夏桑菊胶囊;总黄酮,含量测定
【中图分类号】R714.22【文献标识码】B【文章编号】1007-8517(2009)10-0001-01
夏桑菊胶囊是中药复方制剂,由夏枯草、野菊花、桑叶组成[1]。具有清肝明目,疏风散热的作用。目前有报道[2～3]用高效液相色谱法测定熊果酸的含量,其检测波长206-215nm,与流动相甲醇的吸收波长相近,影响了结果的准确性,且成本相对较高。为了有效控制本品的质量,本文采用紫外分光光度法对夏桑菊胶囊中的总黄酮进行含量测定,结果满意。
1仪器与材料
1.1仪器HP-8452A紫外-可见分光光度仪(美国惠普公司);HP化学工作站。
1.2材料芦丁对照品(批号10080-200508)由中国药品生物制品检定所提供,夏桑菊胶囊由广州粤华药业有限公司提供,所用试剂均为AR级。
2方法与结果
2.1总黄酮含量测定[4]
2.1.1对照品溶液的制备精密称取在120 ℃减压干燥至恒重的芦丁对照品50 mg,置25 ml量瓶中,加甲醇适量,置水浴上微热使溶解,放冷,加甲醇至刻度,摇匀。精密量取10 ml,置于100 ml量瓶中,加水至刻度,摇匀,即得(0.2 mg/ml)。
2.1.2样品溶液的制备取本品内容物0.25 g,精密称定,置50 ml锥形瓶中,加甲醇25 m,精密称定。超声处理(功率250 W,频率20 kHz)30min,放冷,精密称定,取甲醇补足至超声处理前的重量,摇匀,过滤,精密量取续滤液10ml,置100ml量瓶中,加水至刻度,摇匀,即得。
2.1.3最大吸收波长的测定精密吸取芦丁对照品溶液、供试品溶液各3 ml,分别置于25 ml量瓶中,在200～600 nm波长范围内测定吸收光谱。结果芦丁对照品与供试品光谱可见光区吸收图谱基本一致,并且在270nm波长处有最大吸收。见图1。
2.1.4标准曲线的制备精密量取对照品溶液1.0 ml、2.0 ml、3.0 ml、4.0 ml、5.0 ml与6.0 ml,分别置25 ml量瓶中,各加水至6 ml,加5%亚硝酸钠溶液1 ml,摇匀,放置6 min,加10%硝酸铝溶液1 ml,摇匀,放置6分钟,加氢氧化钠试液10 ml,再加水至刻度,摇匀,放置15min,以相应的溶液为空白,在500 nm的波长处测定吸收度,以吸收度为纵坐标、浓度为横坐标,绘制标准曲线。结果见表1。表明芦丁在8.12～48.72 (g/ml范围内具有良好的线性关系。
2.1.5夏桑菊胶囊总黄酮含量的测定精密量取3ml,置25ml量瓶中,照标准曲线制备项下的方法,自“加水至6ml”起依法测定吸收度,从标准曲线上读出供试品溶液中芦丁的重量(μg),计算,即得。分别精密吸取对照品溶液及供试品溶液3ml,按正文方法进行测定,以外标一点法计算含量,结果见表2。
2.1.6精密度试验按2.1.4项下测定法对对照品溶液重复测定6次,结果见表3。
2.1.7重复性试验按供试品测定方法测定,对同一批样品重复测定5次,结果见表4。
2.1.8加样回收率试验精密称取已知含量的同一批号的样品125 mg,分别精密加入芦丁对照品各27.5 mg,按供试品溶液的制备方法制备及上述光谱条件测定,按下式计算回收率,结果见表5。回收率(%)=(测出的总量—样品中的含量)/加入对照品的量×100%
3讨论
夏桑菊颗粒是《中华人民共和国卫生部药品标准》中药成方制剂(第十五册)收载的第11类中药,具有清肝明目、疏风散热,除湿痹,解疮毒之功效,适用于治疗风热感冒引起的目赤头痛,高血压,头晕耳鸣,咽喉肿痛,疔疮肿毒等症状。夏桑菊颗粒的原标准未收载有含量测定方法。为更好控制夏桑菊胶囊的质量,使疗效稳定,故新增了测定总黄酮的含量测定项。笔者在研究中发现测定夏桑菊胶囊总黄酮含量的紫外分光光度法与HPLC法比较有分离效果好、灵敏度高、准确性好等优点,可为夏桑菊胶囊药材质量标准的修订提供科学依据。推测原因[5～6]可能是依据《中国药典》夏枯草项下熊果酸的含量测定条件采用HPLC法测定样品中熊果酸含量,虽经反复优化色谱条件,样品中熊果酸色谱峰仍未能达到基线分离,影响含量测定的准确性;其次,夏枯草、野菊花、桑叶3味药材中含有较多的黄酮,以总黄酮为主要控制指标,该法灵敏、可靠,稳定性好。
参考文献
[1]黄淑彰.HPLC法测定夏桑菊颗粒中熊果酸的含量[J].现代中药研究与实践,2004,18(3):33-35.
[2]李俊锋.HPLC法测定夏桑菊胶囊中熊果酸的含量[J].中医药导报,2008,14(10):65-66.
[3]张珊珊,彭艳梅,吴艳.HPLC法测定夏桑菊颗粒中蒙花苷含量研究[J].中医药导报,2007,13(04):79-80,97.
[4]周红英,李同德,苏雪慧,等.紫外分光光度法测定三种槐叶中芦丁的含量.泰山医学院学报,2004,25(4):29-281.
[5]林海禄,罗明标,刘云海,等.改进的HPLC法测定夏枯草中熊果酸的含量[J].食品科技,2005,(03):83-84,87.
[6]顾晓洁,钱士辉,李友宾,等.夏枯草的化学成分及药理作用研究进展[J].中国野生植物资源,2007,26(2):5-7.
【关键词】夏桑菊胶囊;总黄酮,含量测定
【中图分类号】R714.22【文献标识码】B【文章编号】1007-8517(2009)10-0001-01
夏桑菊胶囊是中药复方制剂,由夏枯草、野菊花、桑叶组成[1]。具有清肝明目,疏风散热的作用。目前有报道[2～3]用高效液相色谱法测定熊果酸的含量,其检测波长206-215nm,与流动相甲醇的吸收波长相近,影响了结果的准确性,且成本相对较高。为了有效控制本品的质量,本文采用紫外分光光度法对夏桑菊胶囊中的总黄酮进行含量测定,结果满意。
1仪器与材料
1.1仪器HP-8452A紫外-可见分光光度仪(美国惠普公司);HP化学工作站。
1.2材料芦丁对照品(批号10080-200508)由中国药品生物制品检定所提供,夏桑菊胶囊由广州粤华药业有限公司提供,所用试剂均为AR级。
2方法与结果
2.1总黄酮含量测定[4]
2.1.1对照品溶液的制备精密称取在120 ℃减压干燥至恒重的芦丁对照品50 mg,置25 ml量瓶中,加甲醇适量,置水浴上微热使溶解,放冷,加甲醇至刻度,摇匀。精密量取10 ml,置于100 ml量瓶中,加水至刻度,摇匀,即得(0.2 mg/ml)。
2.1.2样品溶液的制备取本品内容物0.25 g,精密称定,置50 ml锥形瓶中,加甲醇25 m,精密称定。超声处理(功率250 W,频率20 kHz)30min,放冷,精密称定,取甲醇补足至超声处理前的重量,摇匀,过滤,精密量取续滤液10ml,置100ml量瓶中,加水至刻度,摇匀,即得。
2.1.3最大吸收波长的测定精密吸取芦丁对照品溶液、供试品溶液各3 ml,分别置于25 ml量瓶中,在200～600 nm波长范围内测定吸收光谱。结果芦丁对照品与供试品光谱可见光区吸收图谱基本一致,并且在270nm波长处有最大吸收。见图1。
2.1.4标准曲线的制备精密量取对照品溶液1.0 ml、2.0 ml、3.0 ml、4.0 ml、5.0 ml与6.0 ml,分别置25 ml量瓶中,各加水至6 ml,加5%亚硝酸钠溶液1 ml,摇匀,放置6 min,加10%硝酸铝溶液1 ml,摇匀,放置6分钟,加氢氧化钠试液10 ml,再加水至刻度,摇匀,放置15min,以相应的溶液为空白,在500 nm的波长处测定吸收度,以吸收度为纵坐标、浓度为横坐标,绘制标准曲线。结果见表1。表明芦丁在8.12～48.72 (g/ml范围内具有良好的线性关系。
2.1.5夏桑菊胶囊总黄酮含量的测定精密量取3ml,置25ml量瓶中,照标准曲线制备项下的方法,自“加水至6ml”起依法测定吸收度,从标准曲线上读出供试品溶液中芦丁的重量(μg),计算,即得。分别精密吸取对照品溶液及供试品溶液3ml,按正文方法进行测定,以外标一点法计算含量,结果见表2。
2.1.6精密度试验按2.1.4项下测定法对对照品溶液重复测定6次,结果见表3。
2.1.7重复性试验按供试品测定方法测定,对同一批样品重复测定5次,结果见表4。
2.1.8加样回收率试验精密称取已知含量的同一批号的样品125 mg,分别精密加入芦丁对照品各27.5 mg,按供试品溶液的制备方法制备及上述光谱条件测定,按下式计算回收率,结果见表5。回收率(%)=(测出的总量—样品中的含量)/加入对照品的量×100%
3讨论
夏桑菊颗粒是《中华人民共和国卫生部药品标准》中药成方制剂(第十五册)收载的第11类中药,具有清肝明目、疏风散热,除湿痹,解疮毒之功效,适用于治疗风热感冒引起的目赤头痛,高血压,头晕耳鸣,咽喉肿痛,疔疮肿毒等症状。夏桑菊颗粒的原标准未收载有含量测定方法。为更好控制夏桑菊胶囊的质量,使疗效稳定,故新增了测定总黄酮的含量测定项。笔者在研究中发现测定夏桑菊胶囊总黄酮含量的紫外分光光度法与HPLC法比较有分离效果好、灵敏度高、准确性好等优点,可为夏桑菊胶囊药材质量标准的修订提供科学依据。推测原因[5～6]可能是依据《中国药典》夏枯草项下熊果酸的含量测定条件采用HPLC法测定样品中熊果酸含量,虽经反复优化色谱条件,样品中熊果酸色谱峰仍未能达到基线分离,影响含量测定的准确性;其次,夏枯草、野菊花、桑叶3味药材中含有较多的黄酮,以总黄酮为主要控制指标,该法灵敏、可靠,稳定性好。
参考文献
[1]黄淑彰.HPLC法测定夏桑菊颗粒中熊果酸的含量[J].现代中药研究与实践,2004,18(3):33-35.
[2]李俊锋.HPLC法测定夏桑菊胶囊中熊果酸的含量[J].中医药导报,2008,14(10):65-66.
[3]张珊珊,彭艳梅,吴艳.HPLC法测定夏桑菊颗粒中蒙花苷含量研究[J].中医药导报,2007,13(04):79-80,97.
[4]周红英,李同德,苏雪慧,等.紫外分光光度法测定三种槐叶中芦丁的含量.泰山医学院学报,2004,25(4):29-281.
[5]林海禄,罗明标,刘云海,等.改进的HPLC法测定夏枯草中熊果酸的含量[J].食品科技,2005,(03):83-84,87.
[6]顾晓洁,钱士辉,李友宾,等.夏枯草的化学成分及药理作用研究进展[J].中国野生植物资源,2007,26(2):5-7.