论文部分内容阅读
目的
探讨结核分枝杆菌肝素结合血凝素(HBHA)对小鼠骨髓来源巨噬细胞和小鼠巨噬细胞系Raw264.7细胞极化的影响。
方法在应用免疫荧光法确认HBHA进入巨噬细胞的基础上，对小鼠骨髓来源巨噬细胞(BMDM)和Raw264.7细胞分别施加LPS(100 ng/ml)＋IFN-γ(2.5 ng/ml)、IL-4(20 ng/ml)、不同浓度的HBHA(1 μg/ml，3 μg/ml, 6 μg/ml，10 μg/ml)和ESAT-6(5 μg/ml)。以ELISA法检测细胞培养上清中细胞因子IL-6、IL-12和TNF-α。通过RT-PCR方法检测M1型极化分子标志诱导型一氧化氮合酶(iNOS)和TNF-α等，以及M2型极化分子标志精氨酸酶1(Arg-1)和CD206。最后Western blot检测细胞iNOS和Arg-1蛋白表达水平。
结果结核分枝杆菌HBHA处理BMDM细胞后，培养上清中IL-6、IL-12、TNF-α细胞因子分泌明显增加，iNOS和TNF-α基因表达升高；处理后的Raw264.7细胞中，IL-6分泌量增多，TNF-α表达上调，与ESAT-6对小鼠巨噬细胞的作用结果一致。HBHA和ESAT-6处理小鼠骨髓来源巨噬细胞不能增加M2极化分子标志Arg-1的蛋白表达，但都能诱导小鼠骨髓来源巨噬细胞和Raw264.7细胞iNOS生成增加。
结论结核分枝杆菌HBHA可诱导小鼠巨噬细胞向M1极化。