【摘 要】
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目的:探讨高迁移率族蛋白1(HMGB1)对健康人骨髓间充质干细胞(MSC)增殖及相关细胞因子分泌的影响.方法:分别用CCK-8法和流式细胞术检测HMGB1对MSC增殖的影响,以不同浓度重组人HMGB1(100、200、400、800和1000 ng/ml)分别作用MSC 24、48、72 h后,CCK-8法检测不同浓度的HMGB1对MSC增殖的影响.确定HMGB1对MSC作用的最佳实验药物浓度(200和1000 ng/ml),进一步用流式细胞术明确HMGB1对MSC增殖的影响.采用ELISA与qPCR法检
【机 构】
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中山大学孙逸仙纪念医院血液内科,广东广州510120;广州医科大学附属第三医院超声科,广东广州510145
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目的:探讨高迁移率族蛋白1(HMGB1)对健康人骨髓间充质干细胞(MSC)增殖及相关细胞因子分泌的影响.方法:分别用CCK-8法和流式细胞术检测HMGB1对MSC增殖的影响,以不同浓度重组人HMGB1(100、200、400、800和1000 ng/ml)分别作用MSC 24、48、72 h后,CCK-8法检测不同浓度的HMGB1对MSC增殖的影响.确定HMGB1对MSC作用的最佳实验药物浓度(200和1000 ng/ml),进一步用流式细胞术明确HMGB1对MSC增殖的影响.采用ELISA与qPCR法检测HMGB1作用前后MSC中IL-10、TGF-β1、TSG-6、IFN-γ的表达水平.结果:MSC的鉴定,流式细胞术检测结果显示,培养细胞表面表达CD105、CD73、CD90,不表达CD45、CD34、CD11b、CD19和HLA-DR.CCK-8法检测HMGB1对MSC增殖的影响发现,与对照组比较,HMGB1100、200和400 ng/mL作用于MSC 24、48和72 h可明显促进MSC增殖(P＜0.05),以200 ng/ml浓度作用的增殖效果最明显.流式细胞术检测结果显示,HMGB1于200 ng/ml时可诱导MSC由G1期进入S期,促进MSC增殖.qPCR法检测结果显示,在HMGB1200 ng/ml作用下,MSC中IL-10、TGF-β1、TSG-6 mRNA较作用前表达增高,IFN-γ表达降低.ELISA实验表明,与对照组比较,HMGB1200 ng/ml作用48 h后,MSC分泌的细胞因子IL-10、TGF-β1、TSG-6蛋白水平显著升高(P＜0.05),IFN-γ蛋白水平无明显变化(P＜0.05).结论:重组人HMGB1可促进健康人MSC增殖和影响其细胞因子分泌.
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