Wnt/β-catenin 信号通路在终板软骨细胞体外自然退变模型中的表达

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目的:探讨Wnt/β-联蛋白( catenin )信号通路中关键基因在终板软骨细胞自然退变中的表达变化及意义。方法分离培养大鼠终板软骨细胞,建立终板软骨细胞体外自然传代退变模型。分为空白对照组( P2代细胞)、自然传代组( P5代细胞)及wnt信号通路抑制组,倒置显微镜观察细胞形态,HE染色及甲苯胺蓝染色检测终板软骨细胞表型改变。实时聚合酶链反应检测各组细胞中Ⅱ型胶原、蛋白多糖、SOX-9基因及β-catenin的表达变化;免疫印迹检测β-catenin蛋白表达变化。激光共聚焦显微镜检测β-catenin在细胞内的表达与定位。结果随着自然传代的进行终板软骨细胞表型逐渐丢失;P5代终板软骨细胞较P2代细胞Ⅱ型胶原(P5/P2=0.11,P=0.0039)、蛋白多糖(P5/P2=0.32,P=0.0046)及SOX-9(P5/P2=0.58,P=0.0168)表达明显降低,而Wnt/β-catenin信号通路中关键基因β-catenin(P5/P2=1.62,P=0.0082)表达明显增高;抑制wnt 信号通路后β-catenin (XAV-939/P5=0.23,P=0.0017)表达降低,Ⅱ型胶原(XAV-939/P5=2.60,P=0.0180)、蛋白多糖(XAV-939/P5=2.56,P=0.0041)及SOX-9(XAV-939/P5=1.47,P=0.0382)表达增高。激光共聚焦显微镜观察可见P5代终板软骨细胞较P2代中β-catenin表达增高且明显入核,抑制wnt信号通路后β-catenin表达明显减少。结论β-catenin基因在终板板软骨细胞体外退变过程中具有重要的作用,调控Wnt/β-catenin信号通路有可能保护终板软骨的退变。
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