【摘 要】
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目的 构建人c-jun氨基末端激酶3(c-jun N-terminal kinase3,JNK3)真核表达载体,并在人神经母细胞瘤细胞(SHSY5Y)中稳定表达以探讨JNK3对细胞凋亡的影响.方法 以pDBleu-JNK3为
【机 构】
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重庆医科大学分子医学与肿瘤研究中心,重庆市,400016;重庆医科大学分子医学与肿瘤研究中心,重庆市,400016;重庆医科大学生物化学与分子生物学教研室,重庆市,400016;
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目的 构建人c-jun氨基末端激酶3(c-jun N-terminal kinase3,JNK3)真核表达载体,并在人神经母细胞瘤细胞(SHSY5Y)中稳定表达以探讨JNK3对细胞凋亡的影响.方法 以pDBleu-JNK3为模板,PCR扩增人JNK3基因全长,目的 片段亚克隆至真核表达载体pEGFP-C3,酶切及测序鉴定.LipofectamineTM 2000转染SHSY5Y细胞,并通过G418选择性培养建立稳定表达JNK3的SHSY5Y细胞系.荧光显微镜下观察细胞中JNK3表达,RT-PCR、Western印迹检测JNK3表达.结果 成功构建了pEGFP-C3-JNK3真核表达载体,并建立了稳定表达人JNK3的SHSY5Y细胞系,与对照组相比,其人JNK3基因表达明显升高.结论 稳定表达人JNK3的SHSY5Y细胞系的建立,为进一步研究人JNK3的功能及其与细胞凋亡的关系提供了重要的细胞模型和实验基础.
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