大鼠TIMP-1真核表达载体的构建及其在CHO细胞中的表达

来源 :胃肠病学和肝病学杂志 | 被引量 : 0次 | 上传用户:zlcz1025
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目的 构建大鼠基质金属蛋白酶组织抑制物-1(TIMP-1)的真核表达载体pTIMP-1,并在中国仓鼠卵母(CHO)细胞中表达。方法 从大鼠肝组织提取总RNA,RT-PCR扩增出TIMP-1基因的cDNA片段,将目的片断克隆至pMD18-T载体,酶切和测序鉴定,然后将目的片断酶切回收后插入peDNA3.1,构建真核表达载体pTIMP-1,将该载体转染到CHO细胞后24~48h,收集细胞上清同时制作细胞爬片,双抗体夹心酶联免疫吸附法(ELISA)和免疫组化检测TIMP-1的表达情况。结果 扩增出了长约654b
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