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目的 研究HBx蛋白调控SAMHD1降解,促进肝癌细胞增殖的机制.方法 收集肝癌患者的肿瘤组织及癌旁组织,通过Western blot检测肝癌组织与相应癌旁组织中SAMHD1的表达;通过CRISP/Cas9基因技术构建敲除SAMHD1的稳定细胞系,检测SAMHD1敲除后,HBV稳定肝癌细胞系HepAD38细胞增殖和细胞周期的变化,通过Western blot检测相关周期蛋白表达的变化和Akt/p27通路的影响.检测HBx蛋白过表达对SAMHD1转录和蛋白水平的影响,通过放线菌酮和MG132处理,以及免疫共沉淀手段,进一步探索HBx调控SAMHD1蛋白降解的分子机制.结果 ①研究发现SAMHD1在肝癌组织的表达量低于癌旁组织(P＜0.01).②成功构建稳定敲除SAMHD1的肝癌细胞HepAD38,MTT实验表明稳定敲除SAMHD1的细胞组较对照组增殖加快(P＜0.01).流式细胞术结果表明敲除SAMHD1的稳定细胞组与对照组相比细胞周期发生改变,敲除组G2/M期细胞数(28.16±0.36)较对照组(22.52±0.56)升高(P＜0.01).③Westem blot检测表明敲除SAMHD1的稳定细胞系与对照组细胞相比细胞周期蛋白表达量发生了改变,实验组细胞p27蛋白表达水平减弱,p-Akt蛋白表达水平提高.④Huh7.0细胞中过表达HBx后,SAMHD1蛋白表达减弱.⑤免疫共沉淀结果表明HBx与SAMHD1相互结合;放线菌酮及泛素化IP实验表明HBx引起SAMHD1蛋白衰减时间提前,并使SAMHD1的泛素化程度加强.结论 HBx与SAMHD1相互作用,通过调控SAMHD1泛素化修饰降解SAMHD1,从而影响Akt/p27通路调控细胞周期,促进肝癌细胞增殖.