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目的
确定上皮干细胞在鼓膜上的分布,鼓膜穿孔后干细胞的变化,鼓膜上皮不同部位的体外培养生长特点,建立鼓膜干细胞体外培养和增殖的方法.
方法4只幼年Sprague-Dawley (SD)大鼠和4只成年SD大鼠,均为雌性,作正常鼓膜观察,28只成年雌性大鼠作鼓膜紧张部中央 2 mm穿孔.于穿孔后不同时间取鼓膜冰冻切片,进行β1整合素和角蛋白19免疫组化检测.15只成年雌性SD大鼠30个鼓膜,体外用丝裂霉素C损伤黏膜面,分成鼓环上皮和紧张部中央上皮两部分,比较鼓环和紧张部细胞倍增时间.以1 h为标准,把鼓环细胞按贴壁时间分类.
结果角蛋白19 和β1整合素阳性细胞在紧张部分布于鼓环和锤骨柄区域,在松弛部散在分布,在紧张部中央无阳性细胞.幼年鼠和成年鼠无差别.紧张部急性穿孔后鼓环和锤骨柄阳性细胞数量增加,穿孔边缘无阳性染色.体外培养鼓环上皮细胞倍增时间(51.1±0.73)h明显短于紧张部中央上皮(92.87±5.65)h. 1 h内贴壁的细胞,生长活跃,产生较大的集落,富含上皮干细胞.
结论上皮干细胞在鼓膜紧张部分布于鼓环和锤骨柄区域,在紧张部的中央没有干细胞.在适当的培养液中,干细胞增殖良好,并可以通过贴壁时间进行初步的纯化.