【摘 要】
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目的:克隆人NR4A1基因,构建其重组腺病毒载体.方法:用RT-PCR的方法从人卵巢组织中扩增NR4A1基因全长,经T/A克隆后,亚克隆至腺病毒穿梭质粒pAdTrack-CMV上,构建穿梭质粒pAdtra
【机 构】
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南京医科大学第一附属医院生殖医学中心
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目的:克隆人NR4A1基因,构建其重组腺病毒载体.方法:用RT-PCR的方法从人卵巢组织中扩增NR4A1基因全长,经T/A克隆后,亚克隆至腺病毒穿梭质粒pAdTrack-CMV上,构建穿梭质粒pAdtrack-NR4A1.Pme Ⅰ酶切pAdtrack-NR4A1,然后分别将腺病毒骨架质粒pAdEasy-1和穿梭质粒pAdtrack-NR4A1转化至BJ-5183感受态细菌中进行同源重组.Pac Ⅰ酶切线性化重组质粒AdCMV-NR4A1后转染AD-293细胞进行病毒包装和扩增.通过GFP报告基因观察重组病毒的产生.PCR、Western blot检测NR4A1基因的表达.结果:用RT-PCR方法,从人卵巢组织中扩增出1 797 bp的cDNA,测序证实为人NR4A1基因.构建了NR4A1基因的重组腺病毒载体并制备出高滴度重组病毒.结论:成功地克隆了人NR4A1基因,并构建其重组腺病毒载体,为进一步研究NR4A1基因在相关疾病中的作用奠定了基础.
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