【摘 要】
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目的建立聚乙二醇化重组人睫状神经营养因子（PEGylated ciliary neurotrophic factor,PEG-CNTF）蛋白含量反相高效液相色谱（reversed-phase high performance liquid chromatography,RP-HPLC）检测方法,并进行验证。方法以未修饰的人CNTF原型蛋白为对照品,采用反相高效液相色谱法（reversed-phas
【基金项目】
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北京市科委“生物医药与生命科学创新培育研究-创新品种临床前研究专项”（z151100003915068）； 国药集团新产品开发基金（2011SW02）；
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目的建立聚乙二醇化重组人睫状神经营养因子（PEGylated ciliary neurotrophic factor,PEG-CNTF）蛋白含量反相高效液相色谱（reversed-phase high performance liquid chromatography,RP-HPLC）检测方法,并进行验证。方法以未修饰的人CNTF原型蛋白为对照品,采用反相高效液相色谱法（reversed-phase high performance liquid chromatography,RP-HPLC）测定PEG-CNTF的蛋白含量。色谱柱:Jupiter 5u C4 300A（150 mm×4.6 mm）;流动相:0.1%三氟乙酸的水溶液、0.1%三氟乙酸的乙腈;检测波长:280 nm;流速:1 mL/min;柱温:室温;进样体积:20μL。对该方法进行专属性、线性、精密性、准确性、耐用性验证。结果空白溶剂在CNTF、PEG-CNTF样品设定积分范围内无特异峰出现;建立的方法在PEG-CNTF含量为0.125～4 mg/mL浓度范围内线性关系良好（R2＞ 0.99）;供试品重复性检测的相对标准偏差（RSD）分别为0.21%、0.19%、0.45%,中间精密性检测的RSD分别为0.42%、0.59%、0.83%;制备的高、中、低3个浓度供试品检测结果的回收率均在95%～101%之间;该方法的定量限为50μg/mL,检测限为15.625μg/mL;耐用性验证中连续5次进样CNTF、PEG-CNTF峰面积及保留时间的RSD均小于2%。结论建立的方法具有良好的专属性、线性、精密性、准确性、耐用性,可用于PEG-CNTF中蛋白含量的检测。
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