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检测miR-495与Bmi-1在急性髓系白血病(AML)患者骨髓细胞中的相对表达水平,研究上调miR-495对AML细胞HL-60的作用以及miR-495与Bmi-1的靶向关系。
方法qRT-PCR检测AML患者骨髓样本中miR-495与Bmi-1 mRNA的相对表达量,Western-blot检测Bmi-1蛋白的相对表达量;miR-495 mimics和miR-495 scramble转染入AML细胞HL-60;CCK8实验检测细胞的增殖,流式细胞术检测细胞的凋亡,双荧光素酶报告基因实验验证Bmi-1是否为miR-495的靶基因。
结果AML患者骨髓样本中miR-495相对表达含量降低且Bmi-1 mRNA及其蛋白的相对表达显著升高(P<0.05)。与对照组和空白组比较,miR-495组细胞在24、48、72、96 h的吸光度值均显著降低(P<0.05)。流式细胞术检测显示miR-495组细胞凋亡率较对照组和空白组显著增加(P<0.05)。双荧光素酶报告实验结果显示,共转染miR-495 mimics和pmirGLO-Bmi-1-Wt组的荧光强度显著低于其他三个对照组(P<0.05)。
结论miR-495在AML患者骨髓细胞中异常低表达,而Bmi-1高表达;上调miR-495的表达可抑制HL-60细胞的增殖,促进其凋亡;Bmi-1是miR-495的靶基因。