【摘 要】
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目的 制备针对严重急性呼吸综合征冠状病毒2(SARS-CoV-2)核衣壳蛋白(N)的单克隆抗体(mAbs)并鉴定其生物学特性.方法 利用大肠杆菌原核表达重组SARS-CoV-2 N蛋白,通过杂交瘤技术将小鼠骨髓瘤细胞SP2/0与经重组蛋白免疫的BALB/c小鼠的脾细胞进行融合,采用间接ELISA法和有限稀释法筛选出阳性杂交瘤细胞株,并鉴定其亚型,腹水法制备mAbs,Protein G亲和柱纯化后通过SDS-PAGE、间接ELISA和Western blot检测其纯度、效价及特异性.结果 获得5株能稳定分泌
【机 构】
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贵州医科大学生物与工程学院贵州省感染免疫与抗体工程特色重点实验室/生物与医学工程重点实验室,贵阳550025;贵州医科大学生物与工程学院贵州省感染免疫与抗体工程特色重点实验室/生物与医学工程重点实验室
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目的 制备针对严重急性呼吸综合征冠状病毒2(SARS-CoV-2)核衣壳蛋白(N)的单克隆抗体(mAbs)并鉴定其生物学特性.方法 利用大肠杆菌原核表达重组SARS-CoV-2 N蛋白,通过杂交瘤技术将小鼠骨髓瘤细胞SP2/0与经重组蛋白免疫的BALB/c小鼠的脾细胞进行融合,采用间接ELISA法和有限稀释法筛选出阳性杂交瘤细胞株,并鉴定其亚型,腹水法制备mAbs,Protein G亲和柱纯化后通过SDS-PAGE、间接ELISA和Western blot检测其纯度、效价及特异性.结果 获得5株能稳定分泌抗SARS-CoV-2 N蛋白mAbs的杂交瘤细胞株,分别命名为N1～5.通过腹水法制备获得5个mAbs,亚型鉴定结果显示1个为IgG2a?κ型、4个为IgG1?κ型,其效价均达到2×104以上.Western blot结果表明5个mAbs都能与重组SARS-CoV-2 N蛋白结合.结论 通过杂交瘤技术成功制备了5个能特异性识别重组SARS-CoV-2 N蛋白的mAbs,为开发免疫诊断试剂奠定了基础.
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目的 探究Supervillin在斑马鱼胚胎发育过程中的作用及分子机制.方法 利用Clustal Omega和DNAman软件,分析比较斑马鱼Svil和人类SVIL氨基酸序列同源性.利用RT-PCR和原位杂交技术,分析斑马鱼Svila(Svil蛋白在斑马鱼体内的亚型)在早期胚胎发育中的表达模式.注射反义吗啡环寡核苷酸链(MO),抑制斑马鱼中Svila表达,观察胚胎形态变化.通过Western Blot技术检测β-catenin蛋白表达与核定位情况,并用RT-PCR检测Wnt/β-catenin靶基因表达.
目的 探讨尿毒症微环境下miRNA-22对心肌细胞凋亡和过度自噬的影响,并阐明该过程的潜在机制.方法 收集硫酸吲哚酚(IS)刺激后的H9c2细胞,分别将miR-22模拟物(mimic-miR-22)、miR-22抑制剂(anti-miR-22)和UCP2过表达物(LeUCP2)转染入细胞.采用流式细胞术分析H9c2细胞的存活情况和Western blot分析自噬相关蛋白LC3、p62的表达.结果 与接受对照处理的H9c2细胞相比,IS组的存活H9c2细胞数量减少(87.5％vs 56.9％,P<0.01)
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