【摘 要】
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目的 探讨miR-26b与Wnt/β-catenin信号通路、间充质干细胞(MSCs)不同分化状态的关系及其在MSCs向肝细胞生长因子(HGF)趋化迁移过程中的作用.方法 以大鼠骨髓来源MSCs作为研
【机 构】
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黔南民族医学高等专科学校药理学教研室,都匀558013;贵阳市乌当区人民医院,贵阳 550018;贵州医科大学附属医院儿科,贵阳 550004;贵州医科大学细胞工程生物医药技术国家地方联合工程实验室,
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目的 探讨miR-26b与Wnt/β-catenin信号通路、间充质干细胞(MSCs)不同分化状态的关系及其在MSCs向肝细胞生长因子(HGF)趋化迁移过程中的作用.方法 以大鼠骨髓来源MSCs作为研究对象,用无血清诱导分化培养基分别培养0、7、14、21 d,建立成肝样分化不同阶段的MSCs分化模型,qRT-PCR检测miR-26b在不同分化状态MSCs细胞中的表达;重组腺病毒(Ad-26b)感染MSCs实现miR-26b的高表达,并以空病毒感染MSCs为对照(Ad)后,检测细胞中信号分子active-β-catenin(ABC)、p-β-catenin、β-catenin的表达量以及Wnt/β-catenin经典靶基因c-Myc、RUNX2的转录水平,明确其对MSCs铺展面积和黏着斑的影响以及通过Transwell、Dunn chamber实验,比较其对不同分化状态MSCs趋化迁移的影响.结果 随着诱导分化时间的延长,MSCs的miR-26b表达呈上升趋势,14 d时,miR-26b的表达至高峰,与对照组比较有统计学意义(P<0.05);Ad-26 b组较Ad组ABC蛋白水平升高,p-β-catenin的蛋白水平下降,而 β-catenin总蛋白无变化,Wnt/β-catenin信号下游靶基因c-Myc,RUNX2的表达上调.Ad-26b组高表达miR-26b后可促使MSCs铺展面积变小并呈现极性分布,MSCs细小黏着斑数目增加并向细胞前端周边分布.Transwell及Dunn cham-ber实验表明MSCs诱导分化至7 d,向HGF的趋化迁移能力高于诱导分化0、14和21 d.高表达miR-26b组较Ad组细胞向HGF的趋化迁移能力较对照组增强(P<0.05).结论 miR-26b通过调节Wnt/β-catenin信号通路影响MSCs的分化和趋化迁移.
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