通过小干扰RNA(siRNA)抑制激肽释放酶10(KLK10)基因在结肠癌细胞中的表达，观察其对结肠癌细胞增殖和凋亡及顺铂(DDP)敏感性的影响。
方法实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)检测KLK10 mRNA在正常结肠细胞株NCM460和结肠癌细胞株HRT-S1、HCT116中的表达水平；利用Lipofectamine® RNAi MAX转染试剂将KLK10特异性siRNA转染进入结肠癌细胞株HRT-S1、HCT116；采用噻唑蓝(MTT)、流式细胞术(FCM)法检测siRNA干扰KLK10基因对HRT-S1、HCT116细胞增殖和凋亡的影响；使用Western blot法检测细胞周期蛋白(Cyclin) D1和B细胞淋巴瘤/白血病-2(bcl-2)蛋白水平上的表达变化。
结果KLK10mRNA在结肠癌细胞株HRT-S1和HCT116中表达较正常结肠细胞明显升高(P＝0.001)；siRNA干扰KLK10基因后，KLK10 mRNA表达水平在结肠癌细胞株HRT-S1和HCT116中明显降低(P＝0.002)。siRNA干扰KLK10基因后，Cyclin D1蛋白表达水平在HCT116细胞株中明显降低(P＝0.027)，但在HRT-S1细胞株中差异无统计学意义(P＝0.081)；siRNA干扰KLK10基因后，bcl-2蛋白表达水平在HCT116和HRT-S1细胞株中均明显降低(P＝0.038、0.016)。siRNA抑制KLK10基因后，在HRT-S1和HCT116细胞株中，DDP的半数抑制浓度(IC50)值降低(P＝0.032和0.022)，结肠癌细胞的增殖被抑制；DDP＋siRNA-KLK10组中HCT116和HRT-S1细胞凋亡率较DDP＋si-scramble组明显升高(P＝0.028、0.036)。
结论抑制KLK10基因可以显著抑制结肠癌细胞增殖能力，能够促进肿瘤细胞凋亡，增强肿瘤细胞对DDP的敏感性；抑制KLK10基因可能通过抑制Cyclin D1和bcl-2的表达，从而抑制结肠癌细胞增殖，促进肿瘤细胞凋亡。