【摘 要】
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目的探索转染早老素-突变基因导致SH-SY5Y细胞凋亡的机制. 方法用Xba I 和Acc65 I内切酶将携带野生型和突变型PS-1的pBluescript质粒双酶切,电泳后纯化其cDN A片段,然后将其
【机 构】
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卫生部北京医院神经科,卫生部临床检验中心
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目的探索转染早老素-突变基因导致SH-SY5Y细胞凋亡的机制. 方法用Xba I 和Acc65 I内切酶将携带野生型和突变型PS-1的pBluescript质粒双酶切,电泳后纯化其cDN A片段,然后将其克隆到pCDNA3载体中.由脂质体介导将pCDNA3空载体、携带有野生型和突变型PS-1基因的pCDNA3质粒分别转染到神经母细胞瘤细胞系SH-SY5Y细胞中.用蛋白印迹(We s tern blot)杂交检测其表达.用流式细胞仪(Coulter Epics XL)检测在不同情况下不同细胞凋亡的百分率,荧光显微镜下观察碘化吡啶(PI)、Hoechst 33342(Ho)双染的凋亡细胞的形态 , 并用分子生物学方法检测凋亡细胞的DNA状况. 结果在无血清培养24 h条件下含有空载体、野生型和突变型(A246E) PS-1基因的SY5Y细胞凋亡百分率依次为(6.03±2.03)、(8.3 4±2 .41)、(26.2± 4.6).用SY5Y细胞作为对照,其凋亡百分率为(4.22±1.89).在Aβ25 -35(25 μmol/L)诱导下其凋亡百分率依次为(24.4±3.6)、(27.7±2.5) 、(50.3±8.3).SY 5Y对照组为(18.4±3.1).比较显示含突变早老素1基因细胞的凋亡程度明显升高(P
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