【摘 要】
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目的 应用短发夹状RNA介导的RNA干扰研究乙型肝炎病毒X基因(HBX)和三氧化二砷(As2O3)对HepG2细胞p53表达和活性的影响.方法 以2μmol/L As2O3处理HepG2细胞和表达HBX的HepG2-X,以未处理细胞为对照,提取细胞裂解物或胞核裂解物,采用改进的酶联免疫吸附法检测p53总量和相对活性吸光度.应用脂质体介导具有HBX序列特异性短发夹状RNA表达载体Xi-S1、Xi-S
【机 构】
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410011,长沙,中南大学湘雅二医院肝病研究中心,410011,长沙,中南大学湘雅二医院肝病研究中心,410011,长沙,中南大学湘雅二医院肝病研究中心,410011,长沙,中南大学湘雅二医院肝病研
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目的 应用短发夹状RNA介导的RNA干扰研究乙型肝炎病毒X基因(HBX)和三氧化二砷(As2O3)对HepG2细胞p53表达和活性的影响.方法 以2μmol/L As2O3处理HepG2细胞和表达HBX的HepG2-X,以未处理细胞为对照,提取细胞裂解物或胞核裂解物,采用改进的酶联免疫吸附法检测p53总量和相对活性吸光度.应用脂质体介导具有HBX序列特异性短发夹状RNA表达载体Xi-S1、Xi-S2和序列无关对照Xi-S3转染HepG2-X,再次观察As2O3处理对p53表达和活性的影响.结果 As2O3作用使HepG2和HepG2-X细胞p53蛋白水平上调和p53相对活性比增强.表达HBX后As2O3诱导的p53蛋白水平有所上调,但显著抑制p53相对活性.短发夹状RNA抑制HBX的表达后其对p53的活性抑制得以解除.结论 As2O3使HepG2细胞p53表达上调和活性增强.应用短发夹状RNA介导的RNA干扰有利于研究HBX的表达对p53表达和活性的影响.HBX表达上调As2O3诱导的p53蛋白水平,但显著抑制p53的结合与转录调节活性。
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