探讨生肌玉红膏对正常人真皮成纤维细胞(normal human dermal fibroblasts,NHDFs)增殖、转分化和胶原产生及TGF-β1/Smads通路的影响。
方法将第3~6代NHDFs按照随机数字表法分为对照组、5 μg/ml生肌玉红膏组、2 ng/ml TGF-β1组、2 ng/ml TGF-β1+5 μg/ml生肌玉红膏组、5 ng/ml TGF-β1组、5 ng/ml TGF-β1+5 μg/ml生肌玉红膏组、10 ng/ml TGF-β1组、10 ng/ml TGF-β1+5 μg/ml生肌玉红膏组,每组6个样本,培养72 h后,CCK-8法检测NHDFs增殖,荧光定量PCR检测α-SMA和Ⅰ、Ⅲ型胶原的mRNA表达,消化法检测细胞培养上清液中羟脯氨酸含量,蛋白质印迹法检测α-SMA、Ⅰ、Ⅲ型胶原及Smad2、Smad3和P-Smad2、P-Smad3的蛋白表达。多组间比较采用单因素方差分析,组间两两比较采用LSD-t检验,P<0.05为差异有统计学意义。
结果在2、5、10 ng/ml TGF-β1刺激下,吸光度A值、α-SMA和Ⅰ、Ⅲ型胶原的mRNA与蛋白表达、羟脯氨酸含量、Smad2/3及P-Smad2/3蛋白表达均较对照组显著升高(P<0.05,P<0.01)。无TGF-β1刺激时,生肌玉红膏仅使吸光度A值由1.645±0.052升高至1.796±0.060(P<0.05),α-SMA和Ⅰ、Ⅲ型胶原的mRNA与蛋白表达、羟脯氨酸含量、Smad2/3及P-Smad2/3蛋白表达,差异均无统计学意义(P>0.05)。在2、5 ng/ml TGF-β1刺激下,生肌玉红膏使吸光度A值分别由1.814±0.052、1.970±0.045升高至1.981±0.061、2.133±0.059(P<0.05),在10 ng/ml TGF-β1刺激下,生肌玉红膏使吸光度A值由2.130±0.050降至1.958±0.045(P<0.05)。在2、5、10 ng/ml TGF-β1刺激下,生肌玉红膏使α-SMA mRNA和蛋白表达分别由1.04±0.06、2.42±0.07、7.17±0.11和0.48±0.05、1.17±0.09、2.04±0.09降至0.28±0.06、0.36±0.06、1.89±0.08和0.18±0.03、0.21±0.08、0.91±0.11(P<0.01);Ⅰ型胶原的mRNA与蛋白表达分别由0.73±0.08、1.52±0.08、3.05±0.11和0.36±0.11、0.94±0.10、2.13±0.13降至0.45±0.07、0.46±0.05、1.28±0.09和0.21±0.13、0.24±0.08、0.87±0.09(P<0.01);Ⅲ型胶原的mRNA与蛋白表达分别由1.51±0.09、3.28±0.09、6.96±0.14和0.26±0.08、0.96±0.09、1.96±0.15降至0.66±0.08、0.69±0.08、2.23±0.10和0.08±0.02、0.12±0.02、0.43±0.06(P<0.01);羟脯氨酸含量分别由(7.219±0.590) μg/ml、(8.745±0.514) μg/ml、(10.969±0.489) μg/ml降至(6.242±0.225) μg/ml、(6.603±0.336) μg/ml、(7.516±0.511) μg/ml (P<0.05);在5 ng/ml TGF-β1刺激下,生肌玉红膏对Smad2、Smad3的蛋白表达差异无统计学意义(P>0.05),使P-Smad2、P-Smad3蛋白表达分别由0.56±0.08、0.87±0.13降至0.31±0.07、0.46±0.05(P<0.01)。
结论生肌玉红膏通过促进NHDFs增殖,抑制其向肌成纤维细胞转分化及胶原的产生和分泌,促进创面愈合并预防增生性瘢痕的形成。