松弛素对高糖环境下肾小球系膜细胞分泌细胞外基质的影响及其作用机制研究

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目的

观察人松弛素(RLX)对高糖培养人肾小球系膜细胞分泌细胞外基质的影响,初步探讨其可能作用机制。

方法

将人肾小球系膜细胞株分组:正常糖组:含5.5 mmol/L葡萄糖;高糖组:含30 mmol/L葡萄糖;松弛素干预组:高糖(30 mmol/L葡萄糖)+松弛素(10 ng/ml);α-平滑肌动蛋白(α-SMA)的检测增加TGF-β1阳性对照组,即5.5 mmol/L葡萄糖+TGF-β1(5 μg/L)。CCK-8法检测松弛素对系膜细胞增殖的影响,ELISA法检测细胞上清中Ⅳ型胶原(Col Ⅳ)、纤连蛋白(FN)的表达。qPCR检测系膜细胞TGF-β1 mRNA表达。免疫印迹技术(Western blot)检测α-SMA表达,确定肾小球系膜细胞表型转化情况。

结果

松弛素对正常糖组及高糖组系膜细胞活力均未发现有影响;与正常糖组相比,高糖组各时间点肾系膜细胞分泌Col Ⅳ、FN显著增加,48 h尤为明显(57.28±0.59 vs 41.85±0.03、56.52±0.88 vs 33.80±0.24,P<0.01),α-SMA表达增加(P<0.05)。与高糖组比较,松弛素干预组Col Ⅳ、FN表达在48 h下降最为明显(47.08±0.03 vs 57.28±0.59、36.16±0.52 vs 56.52±0.88,P<0.01),α-SMA表达减少(P<0.01),TGF-β1 mRNA表达下降(P<0.01)。

结论

松弛素能抑制高糖培养的系膜细胞分泌细胞外基质,部分作用机制是通过抑制细胞表型转分化及抑制TGF-β1基因表达,具有抗纤维化作用。

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