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目的 构建针对绿色荧光蛋白(GFP)基因的发夹结构RNA表达载体(SHi-pU6GFP),观察SHi-pU6-GFP对结肠癌LoVo细胞的GFP特异性抑制作用.方法设计合成针对绿色荧光蛋白GFP基因的发夹RNA(shRNA)序列,构建SHi-pU6-GFP质粒.采用报告基因质粒pCX-GFP(5510bp)和含有鼠U6启动子pU6(3.3kb)质粒,应用LipofectamineTM2000将pCX-GFP质粒和SHi-pU6-GFP质粒转染K562细胞和LoVo细胞.荧光显微镜观察转染效果和不同时间的转染效率.结果质粒pU6和SHi-pU6-GFP经EcoRV和XbaⅠ酶切电泳后,前者出现3.3kb和约300bp条带,而后者出现3.3kb和约350 bp条带,与实验设计的针对GFP的shRNA长度相符.说明本实验已成功构建了针对绿色荧光蛋白GFP基因的SHi-pU6-GFP质粒.K562细胞和LoVo细胞中分别观察到转染pCX-EGFP质粒和SHi-pU6-GFP质粒前后发绿色荧光的细胞数目明显减少.结论结肠癌LoVo细胞存在RNA干扰现象,可以进行相关RNA干扰抑制实验。