【摘 要】
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目的:建立一种可反映人精子DNA损伤严重程度的流式细胞检测技术,并对其性能进行评价.方法:DNA损伤精子(单链DNA)与荧光染料吖啶橙(AO)结合后发红色荧光,而DNA完整精子(双链DN
【机 构】
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东南大学附属中大医院生殖医学中心,江苏南京210037;南京欣迪生物药业工程有限责任公司,江苏南京211112
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目的:建立一种可反映人精子DNA损伤严重程度的流式细胞检测技术,并对其性能进行评价.方法:DNA损伤精子(单链DNA)与荧光染料吖啶橙(AO)结合后发红色荧光,而DNA完整精子(双链DNA)与AO结合后发绿色荧光.通过对1 165例人精液样本正常精子群的红色荧光和绿色荧光峰图的分析,确定红色荧光的95％的平均上限和绿色荧光的5％的平均下限为十字象限门的红色荧光和绿色荧光界限,建立精子DNA碎片指数(DFI)的流式细胞检测技术,并分析其重复性和线性范围,确定正常生育男性的参考值.并对122例不育门诊男性的精子DFI、轻度DNA损伤(DFIm)和重度DNA损伤(DFIs)与精子浓度及活力的相关性进行分析.结果:利用十字象限门建立的流式细胞术,可以很明显地区分不同人群的精子DFI、DFIm和DFIs.高、中、低DFI的精液样本使用流式细胞术重复检测10次,所得CV均低于5％.精子DFI在8.93％～53.90％范围内有极好的相关性,相关系数r＞0.99.基于274例正常生育男性的精子DFI结果,以95％上限确定正常参考值范围,正常生育男性精子DFI≤25.50％.精子DFI与精子浓度没有显著相关性,但与精子活动率和前向运动精子百分率呈显著负相关,且DFIs与精子活动率和前向运动精子百分率的相关性(r分别为-0.592和-0.543)明显高于DFIm(r分别为-0.323和-0.236).精子活动率和前向运动精子百分率降低组的精子DFIs和DFIm均显著高于正常组,且两组DFIs的差异(P＜0.01)显著高于DFIm(P＜0.05).结论:本研究建立的可反映精子DNA损伤严重程度的流式细胞术,相比于现有的存在一定缺陷的流式细胞术,更适合在临床常规工作中推广使用.重度精子DNA损伤指标DFIs可能与生殖的关系更为密切.
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