结核分枝杆菌CFP32蛋白的原核表达及其细胞免疫学检测价值评价

来源 :中国人兽共患病学报 | 被引量 : 0次 | 上传用户：email_97

【摘要】

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目的克隆、表达与纯化结核分枝杆菌CFP32蛋白，并对其进行细胞免疫学特性评价。方法PCR扩增cfp32基因片段，与pET-30a（＋）构建重组表达质粒，在大肠杆菌中诱导表达，对融合蛋白进行纯化，EL

【作者】

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万婷孟闯陈祥万李文志发徐正中单法殷月兰焦新安

【机构】

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扬州大学

【出处】

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中国人兽共患病学报

【发表日期】

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2014年6期

【关键词】

：

结核分枝杆菌 CFP32蛋白细胞免疫刺激原 Mycobacterium tuberculosis CFP32 cellular immunity

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目的克隆、表达与纯化结核分枝杆菌CFP32蛋白，并对其进行细胞免疫学特性评价。方法PCR扩增cfp32基因片段，与pET-30a（＋）构建重组表达质粒，在大肠杆菌中诱导表达，对融合蛋白进行纯化，ELISPOT试验测定其细胞免疫应答，通过牛结核外周血IFN-γ释放试验，评价其作为刺激原的能力。结果构建了正确基因序列的重组质粒，并在BL21（DE3）中高效可溶性表达，融合蛋白大小为32ku，纯度达91．8％。ELISPOT显示CFP32蛋白刺激机体分泌IFN-γ和IL-4的细胞数相当，呈现Th1／Th2的平衡

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