分子对接结合荧光光谱法探究单宁酸与血清蛋白结合的pH依赖性

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探明单宁酸(TA)与牛血清蛋白(BSA)/人血清蛋白(HSA)之间的相互作用机制,对于开发蛋白基活性成分载体和递送机制研究具有重要意义.血清白蛋白(BSA/HSA)是常用可溶性载体蛋白,含有多个疏水腔作为活性成分结合位点.本文采用荧光发射光谱研究不同pH值(7.4,5.0,4.0)条件下TA对BSA/HSA荧光猝灭作用,并通过数学方程计算猝灭常数和热力学参数,分析荧光猝灭机理,最后通过位点Marker试验和分子对接技术确定结合位点.结果表明:在不同pH值条件下TA对BSA/HSA荧光均产生猝灭作用,当生理pH 7.4时,猝灭率最高.非线性拟合得到TA与血清蛋白的结合常数在105~107 L/mol数量级,说明结合能力很强,pH值显著影响结合常数(P<0.05),当生理pH 7.4时,结合常数最大.热力学参数与分子对接表明BSA/HSA与TA主要通过氢键和疏水相互作用结合.位点Marker试验和分子对接表明,在pH 7.4时,BSA/HSA与TA结合位点均位于结构域IIA和IIIA之间的疏水腔内,Sudlow\'s site I位点附近.试验证实TA与BSA/HSA的结合存在pH依赖性,对设计开发蛋白-TA载体提供了理论参考,对TA应用有指导意义.
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