【摘 要】
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将诺如病毒(Noroviruses,NVs)RT-PCR特异产物纯化后与pGEM-T载体连接并转化至感受态细胞DH5α,经测序鉴定,提取阳性克隆质粒DNA,梯度稀释后作为实时荧光定量PCR的标准质粒。
【基金项目】
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国家“863”计划项目(2007AA09Z438);国家科技支撑项目(2008BAD94B09)
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将诺如病毒(Noroviruses,NVs)RT-PCR特异产物纯化后与pGEM-T载体连接并转化至感受态细胞DH5α,经测序鉴定,提取阳性克隆质粒DNA,梯度稀释后作为实时荧光定量PCR的标准质粒。使用SYBR Green I染料建立检测贝类中NVs的实时荧光定量RT-PCR方法。结果表明,本方法标准曲线线性范围可达6个数量级(108～103拷贝),R2为0.9983,比常规RT-PCR方法敏感100倍,且特异性良好,与贝类中的轮状病毒、甲肝病毒均不反应;批内和批间重复性良好,变异系数(CV)分别在0.28%～4.03%和1.47%～5.53%范围。该方法具有简便、敏感、高效、稳定等优点,可用于水产品中NVs的定量检测。
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