【摘 要】
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目的：构建特异抑制雌激素受体α（ERα）基因的短发夹RNA（sh RNA）慢病毒表达载体,检测其对ERα的干扰效果,并探讨其对MCF7细胞中乳腺癌干细胞含量的影响。方法：以人的ERα核酸序列为
【机 构】
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福建农林大学生命科学学院,军事医学科学院生物工程研究所
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目的：构建特异抑制雌激素受体α（ERα）基因的短发夹RNA（sh RNA）慢病毒表达载体,检测其对ERα的干扰效果,并探讨其对MCF7细胞中乳腺癌干细胞含量的影响。方法：以人的ERα核酸序列为靶标,根据sh RNA设计原则设计并化学合成特异的sh RNA序列,经退火处理后与p SIH-H1质粒连接,转化大肠杆菌DH5α后挑取单克隆并测序;将该克隆进行病毒包装并感染乳腺癌MCF7细胞,用嘌呤霉素进行筛选,最终得到稳定克隆;收取细胞,用Western印迹和q RT-PCR检测ERα在m RNA及蛋白水平上的变
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