【摘 要】
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目的探究miR-146a在人脐静脉内皮细胞衰老中的调节作用,并初步探究其机制。方法以人脐静脉内皮ECV-304细胞为研究对象,连续传代建立ECV-304细胞复制性衰老模型,衰老相关β-半
【基金项目】
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天津市卫生局科技基金项目(2013KZ020);滨海新区卫生局科技项目(2012BWKY006)
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目的探究miR-146a在人脐静脉内皮细胞衰老中的调节作用,并初步探究其机制。方法以人脐静脉内皮ECV-304细胞为研究对象,连续传代建立ECV-304细胞复制性衰老模型,衰老相关β-半乳糖苷酶(SA-β-gal)法检测不同代次(P2、P6、P9、P12、P15代)细胞中衰老细胞比例,实时定量PCR法检测不同代次(P2、P6、P9、P12、P15代)细胞中miR-146a表达。靶基因预测软件预测miR-146a靶基因。细胞转染建立miR-146a表达上调的P12代细胞(Pre-miR146a组)和miR-146a表达下调的P12代细胞(Anti-miR146a组),并建立相应对照组,SA-β-gal法检测衰老细胞比例,Western blot检测NADPH氧化酶4(NOX4)蛋白表达。结果 P6、P9、P12和P15代细胞的衰老细胞比例明显高于P2代细胞(P<0.05),miR-146a表达则明显低于P2代细胞(P<0.05)。靶基因预测miR-146a的靶基因为NOX4;转染后,Pre-miR146a组衰老细胞比例明显低于对照组(P<0.05),Anti-miR146a组衰老细胞比例明显高于对照组(P<0.05); Pre-miR146a组NOX4蛋白表达明显低于对照组(P<0.05),Anti-miR146a组NOX4蛋白表达明显高于对照组(P<0.05)。结论 miR-146a在衰老的人脐静脉内皮细胞ECV-304中表达下降,上调miR-146a表达能够抑制ECV-304衰老,其机制与调节NOX表达有关。
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