【摘 要】
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目的构建并鉴定人CTLA4Ig和增强型绿色荧光蛋白(EGFP)双基因共表达逆转录病毒载体.方法利用基因重组技术将IRES序列与CTLA4Ig和EGFP基因构建到逆转录病毒载体中,脂质体法将重
【机 构】
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第三军医大学附属西南医院全军烧伤研究所,重庆,400038
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目的构建并鉴定人CTLA4Ig和增强型绿色荧光蛋白(EGFP)双基因共表达逆转录病毒载体.方法利用基因重组技术将IRES序列与CTLA4Ig和EGFP基因构建到逆转录病毒载体中,脂质体法将重组质粒pCTLA4Ig-IRES2-EGFP转染PA317细胞,在G418选择压力下,通过流式细胞检测筛选得到高效共表达CTLA4Ig和EGFP并能产生高滴度重组逆转录病毒的PA317细胞克隆, MTT法测定CTLA4Ig生物学活性. 结果成功构建出含IRES序列的CTLA4Ig和EGFP双基因共表达逆转录病毒载体,生物学活性测定表明CTLA4Ig生物学活性没有受到影响. 结论 IRES序列调控CTLA4Ig与EGFP双基因在细胞中同时独立表达.
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