【摘 要】
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为建立同时鉴别检测猪传染性胸膜肺炎放线杆菌(APP)、副猪嗜血杆菌(HPS)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪肺炎支原体(Mhp)、猪圆环病毒2型(PCV2)和猪瘟病毒(CSFV)这6种病
【机 构】
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西南大学动物科技学院; 重庆出入境检验检疫局/重庆市进出口食品安全工程中心; 重庆大学生物工程学院;
【基金项目】
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质检公益性项目(201310093);国家质检总局科技项目(2014IK247,2015IK332)
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为建立同时鉴别检测猪传染性胸膜肺炎放线杆菌(APP)、副猪嗜血杆菌(HPS)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪肺炎支原体(Mhp)、猪圆环病毒2型(PCV2)和猪瘟病毒(CSFV)这6种病原的寡核苷酸芯片方法,根据这6种病原的特异保守序列,设计了6对特异性引物和探针,建立多重PCR体系,优化杂交参数,进行方法评估。结果显示,该方法检测APP、HPS、Mhp、PCV2、PRRSV及CSFV的灵敏度分别为5.8×10~2copies/L、7.8×10~3copies/L、6.8×10~3copies/L、6.3×10~2copies/L、4.8×10~3copies/L、5.5×102copies/L,且与猪源伪狂犬病病毒、猪细小病毒、日本乙型脑炎病毒、猪水疱病病毒、水泡性口炎病毒、口蹄疫病毒、蓝舌病病毒、小反刍兽疫病毒及沙门菌等9种病原无交叉反应。用建立的多重PCR对186份临床样本的检测结果显示,单一感染率为18.3%(34/186),混合感染率为5.9%(11/186),与测序验证完全一致。该方法为多种病原的流行病学调查和临床诊断提供了一种快速、高通量的检测手段。
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