【摘 要】
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趋化因子受体CCR1是G蛋白偶联受体家族的成员,在肿瘤细胞的生长和转移等方面有重要的调控作用。为了构建稳定表达人CCR1蛋白的TREX-HEK293细胞株,采用PCR技术扩增CCR1的基因
【基金项目】
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中国石油大学(华东)研究生创新基金(14CX06103A)资助
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趋化因子受体CCR1是G蛋白偶联受体家族的成员,在肿瘤细胞的生长和转移等方面有重要的调控作用。为了构建稳定表达人CCR1蛋白的TREX-HEK293细胞株,采用PCR技术扩增CCR1的基因编码序列,将序列连接到pc DNA4.0真核表达载体,经测序鉴定正确后用Lipofectamine TM转染试剂把histag-CCR1基因导入TREX-HEK293细胞,经博莱霉素抗性筛选,四环素诱导,得到阳性克隆并扩大培养成系。采用Dot blot分析检测CCR1表达水平,筛选CCR1表达量最高的细胞株,用CCR1一抗对TREX-HEK293细胞进行免疫荧光染色。实验结果得到了抗博莱霉素阳性细胞克隆;免疫荧光染色结果显示,转染质粒的TREX-HEK293细胞膜呈现绿色荧光,表明成功建立稳定表达趋化因子受体CCR1的TREX-HEK293细胞株,并将CCR1蛋白成功表达在细胞膜上,为CCR1的研究工作提供依据及平台。
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