【摘 要】
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目的:获得低毒性但仍保留其免疫活性、高纯度的重组D227A突变型金葡菌肠毒素A蛋白(rSEAD227A)。方法:利用PCR技术克隆含D227A突变的SEA基因并原核表达,用盐酸胍溶解包涵体并
【机 构】
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广州医科大学附属第二医院、广东省过敏反应与免疫重点实验室、呼吸疾病国家重点实验室
【基金项目】
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国家自然科学基金(81301948,30640033);广州市过敏反应临床医学研究与转化中心建设项目(穗科创字[2016]171号)的资助
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目的:获得低毒性但仍保留其免疫活性、高纯度的重组D227A突变型金葡菌肠毒素A蛋白(rSEAD227A)。方法:利用PCR技术克隆含D227A突变的SEA基因并原核表达,用盐酸胍溶解包涵体并进行梯度透析复性;使用StrepⅡ亲和层析来纯化蛋白;免疫印迹和LC-MS/MS进行鉴定。结果:成功克隆SEA的D227A突变体,获得了高纯度的rSEAD227A蛋白。LCMS/MS分析证实,胰酶消化后的rSEAD227A肽段序列与数据库中SEA的序列匹配。结论:获得了高纯度rSEAD227A蛋白,为SEA的进一步基础研究和临床应用提供了实验基础。
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