骨碎补总黄酮对大鼠成骨细胞增殖、分化及细胞外信号调节激酶表达的影响

来源 :中华地方病学杂志 | 被引量 : 0次 | 上传用户:meinv123321
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目的

观察骨碎补总黄酮(total flavonoidsin drynaria fortunei, TFDF)对大鼠成骨细胞增殖、分化及细胞外信号调节激酶(extracellular signal-regulated kinase ,ERK)表达的影响。

方法

选择10月龄SD雄性大鼠,按体质量采用随机数字表法分为5组:空白对照组,阳性对照组,低、中、高剂量组,每组8只。空白对照组给予等溶生理盐水灌胃;阳性对照组给予蒸馏水配制的骨松宝溶液,灌胃剂量为5.710 g·kg-1·d-1;低、中、高剂量组给予蒸馏水配制的TFDF溶液,灌胃剂量分别为0.054、0.108、0.216 g·kg-1·d-1。5组连续灌胃8 d,末次灌胃后1.5 h,大鼠麻醉处死,无菌心脏取血,提取上清,同组混匀,56 ℃水浴30 min灭活补体,滤膜除菌分装血清用于成骨细胞培养。成骨细胞来自3~ 5日龄SD乳鼠股骨,DMEM培养液冲洗骨髓腔,吹打制备单细胞悬液,采用三维细胞培养系统体外培养大鼠成骨细胞。在无血清DMEM培养后,分别用含上述血清的培养基培养,采用倒置相差显微镜观察成骨细胞形态学变化,噻唑蓝(MTT)法检测成骨细胞增殖情况,对硝基苯磷酸盐(PNPP)法测定碱性磷酸酶(ALP)活性,PCR法测定ERK1、ERK2 mRNA表达。

结果

成骨细胞增殖能力组间比较差异有统计学意义(F= 8.850,P < 0.05),其中阳性对照组,低、中、高剂量组(0.329 ± 0.004、0.302 ± 0.038、0.342 ± 0.010、0.353 ± 0.006)明显高于空白对照组(0.272 ± 0.005,P均< 0.05),中、高剂量组高于低剂量组(P均< 0.05)。成骨细胞ALP活性组间比较差异有统计学意义(F= 13.406,P < 0.05),其中阳性对照组,中、高剂量组[(15.60 ± 0.38)、(14.62 ± 0.36)、(13.48 ± 0.18)U/mg pro]明显高于空白对照组、低剂量组[(6.34 ± 0.16)、(8.68 ± 0.35 )U/mg pro,P均< 0.05],低剂量组高于空白对照组(P < 0.05)。成骨细胞ERK1、ERK2 mRNA表达组间比较,差异有统计学意义(F= 19.452、15.306 ,P均< 0.05),其中阳性对照组(2.407 ± 0.022、2.026 ± 0.014)、中剂量组(2.385 ± 0.018、2.018 ± 0.020)明显高于空白对照组(1.032 ± 0.016、0.968 ± 0.018,P均< 0.05)。

结论

TFDF可促进成骨细胞的分化成熟,其作用机制可能与ERK通路相关。

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