牙龈卟啉单胞菌蛋白酶Ltp1的表达、纯化及酶学性质研究

来源 :安徽医科大学学报 | 被引量 : 0次 | 上传用户：vivian16s

【摘要】

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采用重组法构建Ltp1的原核表达载体,并将其转化至E.coli BL21(DE3)中进行异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导过表达,然后用镍柱层析法粗纯化,分子筛细纯化得到目的蛋白,以SD

【作者】

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顾前程夏荣孔文文

【机构】

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安徽医科大学第二附属医院口腔科,中国科学技术大学结构与生物化学实验室

【出处】

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安徽医科大学学报

【发表日期】

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2020年6期

【关键词】

：

牙龈卟啉单胞菌 Ltp1(PG1641) 蛋白表达纯化牙周病酶学研究 porphyromonas gingivalisLtp1(PG1641)protein

【基金项目】

：

安徽省自然科学基金(编号:1508085MH156)

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采用重组法构建Ltp1的原核表达载体,并将其转化至E.coli BL21(DE3)中进行异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导过表达,然后用镍柱层析法粗纯化,分子筛细纯化得到目的蛋白,以SDS-PAGE电泳和Western blot分析表达产物;将目的蛋白和底物对硝基苯磷酸二钠显色反应分析其活性。SDS-PAGE结果显示有与目的蛋白理论相对分子质量一致的表达条带;Western blot分析证实该蛋白带有6个组氨酸(His)标签的目的蛋白,能够催化磷酸单酯的活性;计算出米氏常数(Km)和最大反应速率

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