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[摘要]目的：研究中药石吞膏对大鼠糖尿病溃疡的愈合作用及对溃疡创面肉芽组织中晚期糖基化终末产物（AGEs）、血管内皮生长因子（VEGF）、高度糖基化的i型跨膜糖蛋白（CD34）含量，从分子水平来探讨中医药促进创面修复的机理，为糖尿病溃疡的预防及治疗的进一步研究提供理论依据。方法：将40只清洁SD大鼠随机分为4组，为正常对照组、阳性对照组、贝复济组、石香膏组，每组每时间点（7d/14d）5只。造模成功后，贝复济组创面以贝复济喷湿纱布覆盖，石香膏组创面外敷石香膏。第7门4天，取大鼠背部创面肉芽组织标本，IHC法检測各组大鼠背部创面样本（肉芽组织）中的AGEs、VEGF、CD34。结果：（1）7天的样本，与正常对照组对比，阳性对照组含量明显上调，贝复济组含量明显上调、石香膏组的AGEs的含量明显下调，与阳性对照组比较，各给药组AGEs的表达下调;与石香膏组比较，贝复济组的AGEs含量。14天时间点的样本，与正常对照组对比，阳性对照组、贝复济组、石吞膏组的AGEs的含量明显上调，与难愈合组比较，各给药组AGEs的表达下调，与石吞膏组比较，贝复济组的AGEs、含量上调：（2）在7天与14天时间点的样本与正常对照组对比，阳性对照组VEGF、CD34含量下调，贝复济组、石吞膏组VEGF、CD34的含量明显上调，与阳性对照组比较，各给药组的VEGF、CD34明显含量上调：与石吞膏组比较，贝复济组的VEGF、CD34表達下调。结论：使用石吞膏对于糖尿病溃疡创面的治疗，能够明显抑制AGEs，并促进VEGF、CD34表达上调对于创面修复具有显著促进作用。
[关键词]石香膏;糖尿病溃疡治疗;AGEs、VEGF、CD34
[中图分类号]R285[文献标识码]A [文章编号]2096-5249（2019）07-016-06
创面愈合过程是复杂的，包括了组织学、内分泌学和生物力学等一整套动态过程，影响其过程的因素包括整个机体和局部情况。糖尿病溃疡作为其最常见并发症之一，给患者个人以及全社会都带来了严重负面影响。我国糖尿病患者不仅数量惊人，且患病率也高于全球平均水平，在2017年高达10.9%。在糖尿病患者中大约15%到25%皮肤因各种因素溃疡，且病情常常反复，长时间难以愈合，严重者会导致截肢甚至引发脓毒血症而危及生命。在全国名老中医沈冯君教授的经验基础上，贵州中医药大学附属医院院内制剂“石香膏”通过长期的临床应用观察到对于糖尿病溃疡的治疗具有良好效果，且已经进行了大量相关基础研究得出了石香膏有促进了提高bFGF等生长因子的表达，使创面肉芽组织加快了生长速度从而缩短创面愈合时间。本研究通过建立糖尿病溃疡大鼠模型，根据AGEs、VEGF、CD34含量来研究石香膏外用于糖尿病溃疡创面的治疗以及相关机制，为该药更深层次研究以及临床应用提供相关的实验基础。
1 实验材料
1.1实验动物;采用SD大鼠40只，体重300g-350g，要求清洁级且为雄性。由贵州医科大学实验动物中心提供，生产许可证征号：SCXK（黔）2012-0001，许可证证号：SYXK（黔）2012-0001，在常温下于贵州医科大学实验动物中心实验室分笼喂养。
1.2实验动物分组及饲养：40只清洁剂雄性SD大鼠（由贵州医科大学动物中心提供）饲养在贵州医科大学动物中心，实验室温度尽量保持在25℃，湿度大约为50%，明暗周期12小时，不限制进食饮水，先通过适应性喂养，在3周称重。随机分为5组，共设2时间点（分别为造模后7d/14d），每组每时间点5只，共40只。（本实验场地以及动物饲料均由贵州医科大学动物实验室中心提供）
1.3实验主要药品、试剂、化学药品、耗材：石香膏（贵阳中医学院第一附属医院中药制剂室制备）、重组牛碱性成纤维细胞成长因子（贝复济）（珠海亿胜生物制药有限公司）、柠檬酸钠缓冲液（上海远慕生物有限公司）、链脲佐菌素（上海远慕生物有限公司）、水合氯醛（上海化学试剂采购供应五联化合厂）、注射用青霉素钠（华北制药股份有限公司）、一抗：AGEs（美国）、一抗：VEGF（美国）、一抗：CD34（兔来源）abeam（美国）、一抗稀释液（中国）、二抗稀释液（中国）、HRP标记的二抗（美国）、PBS（中国）、DAB（中国）、H202（中国）、酒精（中国）、二甲苯（中国）、苏木素（中国南京）、中性树胶（中国北京）、多聚甲醛（中国上海）、TritonX-100（中国上海）、山羊血清（USA）
1.4实验试剂制备：（1）PBS磷酸盐缓冲液：PBS粉剂每袋加ddH20定容至1000mL，调pH7.2，121℃，30min，高压灭菌，4℃保存。（2）4%多聚甲醛固定液：4g多聚甲醛，50-80ml PBS，加热至60℃，持续搅拌至完全溶解，定容100ml，4℃保存。（3）另外，准备双蒸水、二甲苯、梯度乙醇（100、95、85、70、50%）、苏木素。
1.5实验仪器：血糖仪（德国贝朗）、电热压力蒸汽消毒器（YXQ-LS-100A）（上海博讯实业有限公司）、电热恒温鼓风干燥箱（中国上海）、电子分析天平（瑞士）、倒置显微镜（日本）、纯水仪（USA）、切片机（德国）、展片机（德国）、烤片机（德国）
0.6分析软件：Image-pro-plus 6.0、SPSS23.0
2 研究方法
2.1造模及模型评价
2.1.1建立诱导糖尿病大鼠模型及模型评价：造模前18h禁食，自由饮水;于造模当日，对随机30只大鼠（日后分为阳性对照组、石香膏组、贝复济组）以电子称称取体重，以血糖仪测得尾部采血而得出基础血糖值;接下来使用pH为4.0的0.1mmol/L柠檬酸钠缓冲液溶解STZ配制成1%浓度，根据65mg/kg体重，对大鼠注射STZ溶液，3天后检测其随机血糖，当测得大于16.7mmol/L时，为糖尿病模型。（测得血糖大于33.3mmol/L时可以使用诺和灵R 1-4U/d，以控制血糖，提高实验数据准确性），而随机10只大鼠作为正常对照组大鼠仅注射浓度为0.1mmol/L柠檬酸钠缓冲液。
[关键词]石香膏;糖尿病溃疡治疗;AGEs、VEGF、CD34
[中图分类号]R285[文献标识码]A [文章编号]2096-5249（2019）07-016-06
创面愈合过程是复杂的，包括了组织学、内分泌学和生物力学等一整套动态过程，影响其过程的因素包括整个机体和局部情况。糖尿病溃疡作为其最常见并发症之一，给患者个人以及全社会都带来了严重负面影响。我国糖尿病患者不仅数量惊人，且患病率也高于全球平均水平，在2017年高达10.9%。在糖尿病患者中大约15%到25%皮肤因各种因素溃疡，且病情常常反复，长时间难以愈合，严重者会导致截肢甚至引发脓毒血症而危及生命。在全国名老中医沈冯君教授的经验基础上，贵州中医药大学附属医院院内制剂“石香膏”通过长期的临床应用观察到对于糖尿病溃疡的治疗具有良好效果，且已经进行了大量相关基础研究得出了石香膏有促进了提高bFGF等生长因子的表达，使创面肉芽组织加快了生长速度从而缩短创面愈合时间。本研究通过建立糖尿病溃疡大鼠模型，根据AGEs、VEGF、CD34含量来研究石香膏外用于糖尿病溃疡创面的治疗以及相关机制，为该药更深层次研究以及临床应用提供相关的实验基础。
1 实验材料
1.1实验动物;采用SD大鼠40只，体重300g-350g，要求清洁级且为雄性。由贵州医科大学实验动物中心提供，生产许可证征号：SCXK（黔）2012-0001，许可证证号：SYXK（黔）2012-0001，在常温下于贵州医科大学实验动物中心实验室分笼喂养。
1.2实验动物分组及饲养：40只清洁剂雄性SD大鼠（由贵州医科大学动物中心提供）饲养在贵州医科大学动物中心，实验室温度尽量保持在25℃，湿度大约为50%，明暗周期12小时，不限制进食饮水，先通过适应性喂养，在3周称重。随机分为5组，共设2时间点（分别为造模后7d/14d），每组每时间点5只，共40只。（本实验场地以及动物饲料均由贵州医科大学动物实验室中心提供）
1.3实验主要药品、试剂、化学药品、耗材：石香膏（贵阳中医学院第一附属医院中药制剂室制备）、重组牛碱性成纤维细胞成长因子（贝复济）（珠海亿胜生物制药有限公司）、柠檬酸钠缓冲液（上海远慕生物有限公司）、链脲佐菌素（上海远慕生物有限公司）、水合氯醛（上海化学试剂采购供应五联化合厂）、注射用青霉素钠（华北制药股份有限公司）、一抗：AGEs（美国）、一抗：VEGF（美国）、一抗：CD34（兔来源）abeam（美国）、一抗稀释液（中国）、二抗稀释液（中国）、HRP标记的二抗（美国）、PBS（中国）、DAB（中国）、H202（中国）、酒精（中国）、二甲苯（中国）、苏木素（中国南京）、中性树胶（中国北京）、多聚甲醛（中国上海）、TritonX-100（中国上海）、山羊血清（USA）
1.4实验试剂制备：（1）PBS磷酸盐缓冲液：PBS粉剂每袋加ddH20定容至1000mL，调pH7.2，121℃，30min，高压灭菌，4℃保存。（2）4%多聚甲醛固定液：4g多聚甲醛，50-80ml PBS，加热至60℃，持续搅拌至完全溶解，定容100ml，4℃保存。（3）另外，准备双蒸水、二甲苯、梯度乙醇（100、95、85、70、50%）、苏木素。
1.5实验仪器：血糖仪（德国贝朗）、电热压力蒸汽消毒器（YXQ-LS-100A）（上海博讯实业有限公司）、电热恒温鼓风干燥箱（中国上海）、电子分析天平（瑞士）、倒置显微镜（日本）、纯水仪（USA）、切片机（德国）、展片机（德国）、烤片机（德国）
0.6分析软件：Image-pro-plus 6.0、SPSS23.0
2 研究方法
2.1造模及模型评价
2.1.1建立诱导糖尿病大鼠模型及模型评价：造模前18h禁食，自由饮水;于造模当日，对随机30只大鼠（日后分为阳性对照组、石香膏组、贝复济组）以电子称称取体重，以血糖仪测得尾部采血而得出基础血糖值;接下来使用pH为4.0的0.1mmol/L柠檬酸钠缓冲液溶解STZ配制成1%浓度，根据65mg/kg体重，对大鼠注射STZ溶液，3天后检测其随机血糖，当测得大于16.7mmol/L时，为糖尿病模型。（测得血糖大于33.3mmol/L时可以使用诺和灵R 1-4U/d，以控制血糖，提高实验数据准确性），而随机10只大鼠作为正常对照组大鼠仅注射浓度为0.1mmol/L柠檬酸钠缓冲液。