3D干细胞微载体修复兔膝关节软骨缺损的实验研究

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目的:利用3D TableTrixn TM干细胞微载体培养脐带来源间充质干细胞(Umbilical cord mesenchymal stem cells,UC-MSCs),并进一步评价其修复兔膝关节软骨缺损的效果。n 方法:将UC-MSCs在3D TableTrixn TM体系中培养7 d后,评价细胞活力并通过细胞形态观察、三向分化以及流式细胞术进行干细胞鉴定。通过植入裸鼠皮下进行病理组织学观察,进一步评价3D TableTrixn TM体系的生物安全性。将12只新西兰大白兔制作双膝关节股骨滑车软骨缺损模型,后随机分为两组:对照组,不予任何治疗;UC-MSCs组,置于载有UC-MSCs的3D TableTrixn TM(UC-MSCs组)。于术后3、6个月分别取材,进行大体观察、HE染色、甲苯胺蓝染色、Masson染色并对比观察,并依照国际软骨修复协会(International Cartilage Repair Society,ICRS)大体观和组织学评分对再生组织的进行定量评价。n 结果:UC-MSCs在3D TableTrixn TM体系中存活良好,培养7 d后活死染色未见明显死细胞,且在三维支架内部实现了明显增殖。将细胞消化后进行鉴定,证实细胞保持了其作为干细胞的特征。裸鼠皮下植入28 d后,见团块形成,外有纤维包膜包裹。HE染色可见3D TableTrixn TM支架结构完整并有新生血管长入。在体内研究中,将3D TableTrixn TM填充软骨缺损区域,经过3个月和6个月的观察,显示UC-MSCs组的软骨修复效果优于对照组,且3个月及6个月的ICRS大体观评分分别为(8.50±0.58)分和(11.25±0.96)分,高于对照组(4.50±0.58)分和(8.75±0.50)分,差异均有统计意义(n P<0.05);3个月及6个月的组织学评分分别为(11.00±2.16)分和(17.00±0.82)分,亦高于对照组的(5.25±0.50)分和(11.25±0.96)分,差异有统计学意义(n P<0.05)。n 结论:3D TableTrixn TM干细胞微载体为干细胞培养提供了理想的微环境,并可以用于软骨缺损的治疗。n “,”Objective:To culture UC-MSCs with 3D TableTrixn TM stem cell microcarrier and further evaluate the effects on cartilage defect of knee joint in rabbit model.n Methods:UC-MSCs were cultured in 3D TableTrixn TM system for 7 d. The cell viability was evaluated and characteristics of UC-MSCs were identified. The safety of 3D 3D TableTrixn TM system was further evaluated by subcutaneous implantation in nude mice. Twelve New Zealand white rabbits were randomly divided into control group and experimental group. The experimental group was placed in 3D TableTrixn TM with UC-MSCs. At 3 and 6 months after the operation, the samples were taken for general observation, HE, toluidine blue, Masson staining for comparative observation. According to the International Cartilage Repair Society (ICRs), general evaluation and histological score was evaluated quantitatively.n Results:The UC-MSCs survived well in 3D TableTrixn TM system. There was no dead cell with dead/live staining after 7 d culture. UC-MSCs proliferated in 3D TableTrixn TM system. After digestion, the UC-MSCs were identified to maintain the characteristics of MSCs. After 28 d of subcutaneous implantation in nude mice, agglomerations were formed and covered with fibrous membrane. HE staining showed that the 3D TableTrixn TM scaffold structure was complete and neovascularized. In vivo study, 3D TableTrixn TM was used to fill the cartilage defect. At 3 and 6 months after operation, the effects on cartilage repair in the experimental group was better than that in the control group. The overall score of ICRS (3 month, 8.50±0.58 n vs 4.50±0.58; 6 months, 11.25±0.96 n vs 8.75±0.50, n P<0.05) and histological score of the experimental group were higher than that of the control group (3 month, 11.00±2.16n vs 5.25±0.50; 6 month 17.00±0.82 n vs 11.25±0.96, n P<0.05).n Conclusions:3D TableTrixn TM microcarrier provides an ideal microenvironment for stem cell culture, and that can be used in the treatment of cartilage defects.n
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