论文部分内容阅读
摘要：目的： 探讨小儿急性淋巴细胞白血病（ALL）与人类白细胞抗原（HLA）基因多态性的相关性。方法： 采用序列特异性引物聚合酶链反应技术（PCR/SSP）对我院2009年1月～2015年3月间收治的120例ALL患儿进行HLA-A、B、DRB1基因检测，同时与120例健康新生儿脐带血的HLA基因进行比较，探讨两组HLA基因分布频率的差异。结果： ALL患儿的HLA-A*02、B*48、DRB1*15等位基因频率明显高于对照组，两组比较有统计学差异，（P<0.01），而HLA-A*11、DRB1*07、DRB1*11等位基因频率明显低于对照组，两组比较有统计学差异，（P<0.05）。结论： HLA-A*02、B*48、DRB1*15等位基因对ALL患儿具有遗传易感作用，而HLA-A*11、DRB1*07、DRB1*11等位基因对ALL患儿具有遗传拮抗作用。
关键词：急性淋巴细胞白血病，HLA，相关性
ALL为儿童常见恶性肿瘤，在小儿白血病中约占到65%。ALL危害性大，患儿病死率高，故目前成为医学界研究的重要课题。白血病的产生与其他恶性肿瘤相似，其产生在于基因缺陷，基因缺陷可改变细胞的分化、增殖及衰亡。白血病的产生除与外界环境因素等存在密切关系以外，患者自身免疫功能也是重要因素之一。不同患者对于白血病易感性与免疫功能不尽相同，存在高度多态性，与抗原呈递及识别有关的HLA分子，可能是本病的重要遗传因素[1-2]。如能找出ALL的HLA易感基因，对明确ALL致病基因与机制都具有重要意义。本研究采取PCR/SSP分别检测了120例ALL患儿及120例健康新生儿脐带血的HLA-A、B、DRB1基因分型，旨在探讨HLA基因多态性与小儿ALL的相关性。现将结果报告如下。
1.资料与方法
1.1 研究对象
选取2009年1月～2015年3月我院确诊的120例ALL患儿，所有患儿均参照FBA诊断标准进行确诊。其中男79例，女41例，年龄1～14岁，平均（6.23±0.46）岁。健康对照组选取无血缘关系的120例健康新生儿脐带血样本。
1.2 方法
1.2.1 DNA提取
采取微量全血快速DNA提取。紫外分光光度计对DNA浓度与纯度进行测量。将其置于-20℃冰箱中备用。
1.2.2 等位基因HLA-A、B、DRB1分型
采用PCR/SSP分型技术进行HLA-A、B、DRB1位点基因分型。
1.2.3 结果判定
DNA扩增产物于2%琼脂糖凝胶内（含有5μl Gold-view）电泳，于凝胶成像仪上拍照，应用配套分析软件判定HLA基因型别。
1.3 统计处理
两组基因频率比较采用Spss19.0软件进行x2检验。相对危险度（RR）依据woolf公式计算。
2.结果
通过对ALL患儿及健康新生儿脐带血的HLA-A、B、DRB1基因检测，结果显示，ALL患儿的A*02、B*48、DRB1*15等位基因频率明显高于对照组（x2=15.491、12.018、15.065，RR=5.804、7.057、8.694），而A*11、DRB1*07、DRB1*11等位基因频率明显低于对照组（x2=12.075、6.260、7.855，RR=0.293、0.312、0.286）。具体见表1。
表1 病例组与对照组差异显著的HLA基因频率
3.讨论
HLA基因定位在第6号染色体短臂上6p21.3，全长4000kb，是由一系列基因座组成，也是迄今为止所知的最复杂的人类遗传系统。HLA基因多态性参与了多种疾病的产生及发展过程，HLA分子表达水平和肿瘤免疫关系密切。自上世纪60年代以来，HLA基因多态性与疾病相关性的研究，涉及的疾病多达数百种，白血病就是其中之一。尽管白血病的发病机制尚不完全清晰，但多数认为其产生是环境及遗传因素共同作用的结果。
HLA产物在人体内所有有核细胞表面几乎均有表达，与免疫球蛋白及T细胞受体分子等共同参与到免疫识别与应答中。HLA基因多态性对个体免疫功能起到决定性作用，其决定了免疫系统是否能有效识别与清除发生畸变的细胞，是否能免疫耐受外源及自身改变的細胞。故由此来看，HLA可能在白细胞的产生及发展过程中起着重要作用。
但目前有关HLA基因多态性与ALL相关性的报道尚无统一结论，罗奇志[3]等的研究结果显示，在HLA-B等位基因中，B58基因在ALL中的表型频率明显高于对照组，P值为0.0242，RR为7.4055。王晓静[4]等通过对HLA-DRB1*15与儿童ALL关系的研究得出，ALL患儿的DRB1*15的抗原频率与等位基因频率分别为40.12%、22.62%，均明显高于健康对照组。本研究结果则显示，在HLA-A、B、DRB1等位基因中，ALL患儿的A*02、B*48、DRB1*15等位基因频率明显上升，提示其对小儿ALL患儿具有遗传易感作用，是ALL发生的危险标志。而A*11、DRB1*07、DRB1*11等位基因频率明显下降，提示其对小儿ALL患儿具有遗传拮抗作用，是ALL的保护性标志。研究结果与罗奇志有差异，而与王晓静一致。分析研究结果差异的原因多是ALL作为一种多基因遗传易感疾病，在存在多个易感位点情况下，不同位点于不同人群中存在不同优势，因而产生和相同疾病相关的多样性。
综上所述，A*02、B*48、DRB1*15等位基因对小儿ALL患儿具有遗传易感作用，而A*11、DRB1*07、DRB1*11等位基因对小儿ALL患儿具有遗传拮抗作用。但考虑到HLA基因和ALL的相关性因民族、人种、地域等的差异而有不同，而本研究选取的研究对象均为我院收治的患儿，且样本小，存在局限性。
参考文献：
[1] 侯慧，刘建平.HLA基因多态性与白血病相关性的研究进展[J].疾病监测与控制杂志，2010，04（03）：134-135.
[2] 刘楠，林晓娥，袁方，等.HLA-A/B/C/DRB1/DQB1基因多态性与急性淋巴细胞白血病关联分析[J].军事医学，2013，37（08）：574-577.
[3] 罗奇志，李立新，谢毓滨，等.湖南汉族白血病与HLA-A、B、DRB1基因的相关性研究[J].南方医科大学学报，2008，28（06）：1016-1018.
[4] 王晓静，艾晓非，孙海燕，等.HLA-DRB1*15与162例儿童急性淋巴细胞白血病发病的关系[J].中国实验血液学杂志，2009，17（06）：1507-1510.
关键词：急性淋巴细胞白血病，HLA，相关性
ALL为儿童常见恶性肿瘤，在小儿白血病中约占到65%。ALL危害性大，患儿病死率高，故目前成为医学界研究的重要课题。白血病的产生与其他恶性肿瘤相似，其产生在于基因缺陷，基因缺陷可改变细胞的分化、增殖及衰亡。白血病的产生除与外界环境因素等存在密切关系以外，患者自身免疫功能也是重要因素之一。不同患者对于白血病易感性与免疫功能不尽相同，存在高度多态性，与抗原呈递及识别有关的HLA分子，可能是本病的重要遗传因素[1-2]。如能找出ALL的HLA易感基因，对明确ALL致病基因与机制都具有重要意义。本研究采取PCR/SSP分别检测了120例ALL患儿及120例健康新生儿脐带血的HLA-A、B、DRB1基因分型，旨在探讨HLA基因多态性与小儿ALL的相关性。现将结果报告如下。
1.资料与方法
1.1 研究对象
选取2009年1月～2015年3月我院确诊的120例ALL患儿，所有患儿均参照FBA诊断标准进行确诊。其中男79例，女41例，年龄1～14岁，平均（6.23±0.46）岁。健康对照组选取无血缘关系的120例健康新生儿脐带血样本。
1.2 方法
1.2.1 DNA提取
采取微量全血快速DNA提取。紫外分光光度计对DNA浓度与纯度进行测量。将其置于-20℃冰箱中备用。
1.2.2 等位基因HLA-A、B、DRB1分型
采用PCR/SSP分型技术进行HLA-A、B、DRB1位点基因分型。
1.2.3 结果判定
DNA扩增产物于2%琼脂糖凝胶内（含有5μl Gold-view）电泳，于凝胶成像仪上拍照，应用配套分析软件判定HLA基因型别。
1.3 统计处理
两组基因频率比较采用Spss19.0软件进行x2检验。相对危险度（RR）依据woolf公式计算。
2.结果
通过对ALL患儿及健康新生儿脐带血的HLA-A、B、DRB1基因检测，结果显示，ALL患儿的A*02、B*48、DRB1*15等位基因频率明显高于对照组（x2=15.491、12.018、15.065，RR=5.804、7.057、8.694），而A*11、DRB1*07、DRB1*11等位基因频率明显低于对照组（x2=12.075、6.260、7.855，RR=0.293、0.312、0.286）。具体见表1。
表1 病例组与对照组差异显著的HLA基因频率
3.讨论
HLA基因定位在第6号染色体短臂上6p21.3，全长4000kb，是由一系列基因座组成，也是迄今为止所知的最复杂的人类遗传系统。HLA基因多态性参与了多种疾病的产生及发展过程，HLA分子表达水平和肿瘤免疫关系密切。自上世纪60年代以来，HLA基因多态性与疾病相关性的研究，涉及的疾病多达数百种，白血病就是其中之一。尽管白血病的发病机制尚不完全清晰，但多数认为其产生是环境及遗传因素共同作用的结果。
HLA产物在人体内所有有核细胞表面几乎均有表达，与免疫球蛋白及T细胞受体分子等共同参与到免疫识别与应答中。HLA基因多态性对个体免疫功能起到决定性作用，其决定了免疫系统是否能有效识别与清除发生畸变的细胞，是否能免疫耐受外源及自身改变的細胞。故由此来看，HLA可能在白细胞的产生及发展过程中起着重要作用。
但目前有关HLA基因多态性与ALL相关性的报道尚无统一结论，罗奇志[3]等的研究结果显示，在HLA-B等位基因中，B58基因在ALL中的表型频率明显高于对照组，P值为0.0242，RR为7.4055。王晓静[4]等通过对HLA-DRB1*15与儿童ALL关系的研究得出，ALL患儿的DRB1*15的抗原频率与等位基因频率分别为40.12%、22.62%，均明显高于健康对照组。本研究结果则显示，在HLA-A、B、DRB1等位基因中，ALL患儿的A*02、B*48、DRB1*15等位基因频率明显上升，提示其对小儿ALL患儿具有遗传易感作用，是ALL发生的危险标志。而A*11、DRB1*07、DRB1*11等位基因频率明显下降，提示其对小儿ALL患儿具有遗传拮抗作用，是ALL的保护性标志。研究结果与罗奇志有差异，而与王晓静一致。分析研究结果差异的原因多是ALL作为一种多基因遗传易感疾病，在存在多个易感位点情况下，不同位点于不同人群中存在不同优势，因而产生和相同疾病相关的多样性。
综上所述，A*02、B*48、DRB1*15等位基因对小儿ALL患儿具有遗传易感作用，而A*11、DRB1*07、DRB1*11等位基因对小儿ALL患儿具有遗传拮抗作用。但考虑到HLA基因和ALL的相关性因民族、人种、地域等的差异而有不同，而本研究选取的研究对象均为我院收治的患儿，且样本小，存在局限性。
参考文献：
[1] 侯慧，刘建平.HLA基因多态性与白血病相关性的研究进展[J].疾病监测与控制杂志，2010，04（03）：134-135.
[2] 刘楠，林晓娥，袁方，等.HLA-A/B/C/DRB1/DQB1基因多态性与急性淋巴细胞白血病关联分析[J].军事医学，2013，37（08）：574-577.
[3] 罗奇志，李立新，谢毓滨，等.湖南汉族白血病与HLA-A、B、DRB1基因的相关性研究[J].南方医科大学学报，2008，28（06）：1016-1018.
[4] 王晓静，艾晓非，孙海燕，等.HLA-DRB1*15与162例儿童急性淋巴细胞白血病发病的关系[J].中国实验血液学杂志，2009，17（06）：1507-1510.