【摘 要】
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提取热纤梭菌(Clostridium.sp)基因组DNA,首次通过PCR克隆了该菌的β-葡聚糖酶基因全长.结果表明:该基因全长1 040 bp,ORF为1003 bp,编码334个氨基酸,计算分子质量为37.8 kD,
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提取热纤梭菌(Clostridium.sp)基因组DNA,首次通过PCR克隆了该菌的β-葡聚糖酶基因全长.结果表明:该基因全长1 040 bp,ORF为1003 bp,编码334个氨基酸,计算分子质量为37.8 kD,等电点为7.67.经Blast分析,该序列与热纤梭菌同源性最高(99%),而与基因库中嗜热梭菌的同源性为94%,该基因已被GenBank接受(AY225318).用Bam H Ⅰ和Xho Ⅰ双酶切目的片段和表达载体pET-30a(+)后相连接,构建重组表达载体pET-clo,并导入BL21细菌中表达.酶学特性表明:SDS-PAGE电泳在37 kD左右有表达蛋白带,该工程菌最适酶活29.4U/mL,是出发菌的15倍,最适温度80℃,最适pH9.该工程菌可作为耐热性材料构建耐热性好、酶活高的杂合基因工程菌.
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