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目的
探讨肝纤维化进展过程中枯否细胞(KCs)亚群与程序性死亡受体-1(PD-1)蛋白表达的变化。
方法取SD大鼠40只，随机数字表法分为对照组(16只)和模型组(24只)。模型组大鼠皮下注射40%CCl4/花生油1.0 ml/kg，每周2次，共计8周。对照组在相应时间皮下注射花生油。分别于1、2、4、8周每组各处死4只。(1)取出肝脏分别行苏木精-伊红(HE)染色及马松(Masson)染色，分析肝脏的病理变化及纤维化进程。以M1亚群抗体CD86和M2亚群抗体CD163进行免疫组织化学染色鉴别M1和M2细胞，检测不同时期M1和M2两个亚群与纤维化进程的关系。(2)分离培养纤维化不同时期的KCs，墨汁吞噬试验分析其吞噬能力的变化；流式细胞亚群分型检测肝纤维化进展过程中M0、M1和M2所占的比例变化趋势；免疫荧光检测肝纤维化进展过程中KCs PD-1蛋白的表达变化。
结果CCl4导致了明显的肝损伤和纤维化，KCs吞噬能力逐渐减弱；流式结果显示模型组M1型KCs的比例在肝纤维化早期(1～2周)快速增加(0.250±0.016)，显著高于M2型KCs(0.136±0.009)(P<0.05)，第4周达峰后下降；M2型KCs的比例早期增加较慢，到后期(8周)时(0.325±0.023)超过M1型(0.224±0.017)(P<0.05)。免疫荧光结果表明，模型组KCs PD-1蛋白表达第2周短暂下降后上升，第4周以后显著高于对照组(P<0.05)。
结论在肝纤维化早期，M1型KCs比例占优势，对细胞的活化和募集发挥主导作用；而M2型KCs在M1型KCs的活化作用下持续增加，在肝纤维化后期超过M1型KCs，更直接地促进纤维化。KCs早期表达PD-1下降引起M1早期快速上升，参与了KCs亚群的分化和肝的纤维化。