klf4反义基因腺病毒载体的构建和鉴定

来源 :中国实验血液学杂志 | 被引量 : 0次 | 上传用户：joyce

【摘要】

：

本研究针对klf4基因，利用AdEasy腺病毒载体系统构建人klf4反义基因重组腺病毒载体。klf4基因片段反向克隆到穿梭质粒pShuttle—CMV，利用同源重组技术在大肠杆菌BJ5183内构建重

【作者】

：

张耀方张睿娟杨林花张媛周剑峰曹阳陈彩虹

【机构】

：

山西医科大学第二医院血液科,华中科技大学同济医学院附属同济医院血液科

【出处】

：

中国实验血液学杂志

【发表日期】

：

2010年3期

【关键词】

：

klf4反义基因内皮细胞重组腺病毒载体 antisense klf4 gene endothelium recombinant adenovirus vec

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本研究针对klf4基因，利用AdEasy腺病毒载体系统构建人klf4反义基因重组腺病毒载体。klf4基因片段反向克隆到穿梭质粒pShuttle—CMV，利用同源重组技术在大肠杆菌BJ5183内构建重组腺病毒Ad-反义klf4，酶切线性化重组载体，并在293细胞中扩增、制备重组病毒。经限制性酶切、PCR扩增和测序检测鉴定，证明Ad-反义klf4重组腺病毒基因正确插入后，将Ad-反义klf4转染人原代脐静脉内皮细胞，采用real—timePCR、Western blot方法观察其对内皮细胞中KLF4表达的抑制

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