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利用引物搭桥的方法，经PCR扩增，获得了纳豆激酶成熟肽基因（NK），从而构建了大肠杆菌表达质粒NK／pTWIN1，NK／PET32a及NK／PML—c2x，经分别转化宿主菌ER2566，BL21和ER2566，获得了转纳豆激酶基因重组菌．结果表明，NK／pTWIN1-ER2566和NK／PET32a—BL21的纳豆激酶蛋白表达量较高．本研究选用NK／pTWIN1-ER2566作为表达菌株，对其进行发酵表达．SDS—PAGE显示，目的蛋白约占菌体总蛋白的36％，该蛋白是以包涵体形式存在的．包涵体经收集、蛋白