论文部分内容阅读
（湖南农业大学，湖南 长沙 410128）
摘 要：为探究宁乡猪肉质性状相关基因SLC13A5多态性，利用PCR—RFLP技术检测SLC13A5基因。结果表明，第251 bp处有一个T/C的碱基突变，导致PCR—RFLP—Bsu36 I多态性。在宁乡猪中，CC基因型频率为0.830 8，C基因频率为0.876 9；在大白猪中，TT基因型频率为0.484 8，T基因频率为0.706 9。本研究为对宁乡猪肉质性状相关基因SLC13A5的进一步研究打下了基础。
关键词：宁乡猪；SLC13A5基因；肉质性状
中图分类号：S813.3 文献标识码：A 文章编号：1001-0769（2017）04-0053-02
宁乡猪是湖南宁乡的地方猪种，也是我国四大名猪（荣昌猪、太湖猪、金华猪、宁乡猪）之一。相对于其他猪种，它有着矮短圆肥、结构疏松、清秀细致、背腰平直、腹大下垂拖地、臀部斜尻、四肢粗短、前肢挺直、后肢弯曲等特点[1]。另外，宁乡猪因早熟易肥、蓄脂力强、肉质细嫩、肉味鲜美[2]、肌肉中夹有较多脂肪、仔猪烤制皮不开裂等特点而享誉中外[3]。
有研究发现SLC13A5基因能够对小鼠的干细胞ATP/ADP比值进行调节，通过依次调节肝脏AMP激活蛋白激酶（AMPK）信号通道、诱导过氧化酶体增殖物激活受体γ共激活因子-1α（PGC-1α）、调节乙酰辅酶A羧化酶-2（ACC-2）和固醇调节元件结合蛋白（SREBP-1c）的含量，从而调节肝脏线粒体的生物合成作用，最终对脂质氧化、能量消耗和肝脏脂质的从头合成进行调节。
另外，有研究发现，猪的SLC13A5基因与肌内脂肪含量有显著的关系。本实验对SLC13A5基因的多态性研究，是为了筛选可用于标记宁乡猪肉质性状的遗传标记。
1材料与方法
1.1 样本采集
宁乡猪耳样总共65头来源于宁乡大龙畜牧科技有限公司，大白猪耳样总共330头来源于正虹科技股份有限公司。
1.2 基因组DNA提取
基因组DNA的提取按照常规酚-氯仿萃取的方法进行[4]。
1.3 引物的合成
引物的合成以及聚合酶链式反应（Polymerase Chain Reaction，PCR）扩增检测SLC13A5基因多态性的引物设计为：
正向引物：5’-CTCATTCCTGCGTCTTATTC-3’；
反向引物为5’-GCTGTGGGTGGTGTCATT-3’。
PCR条件：PCR反应体系（总体积 20 μL）：10×Buffer 2 μL，2 mmol/L dNTPs 1.6μL，20 mmol/L MgCl2 1.6 μL，Taq DNA聚合酶（5 U/μL）0.4 μL，DNA模板（100 ng/μL）1 μL，上下游引物（10 pmol/μL）各0.4 μL，ddH2O 12.6 μL。
反应程序：94 ℃预变性5 min；94 ℃变性30 s，60 ℃退火30 s，72 ℃延伸50 s，共35个循环；72℃后延伸8 min，最后 4 ℃保存。
1.4 PCR-RFLP检测
在10 μL PCR产物（815 bp）中加入0.8 μL 10×内切酶缓冲液、0.2 μL限制性内切酶Bsu36 I和1 μL双蒸水，总体积为12 μL，37 ℃消化4 h～10 h。用2 %琼脂糖凝胶电泳酶切产物，并对基因分型。
2结果与分析
2.1 SLC13A5基因的扩增产物的酶切
若SLC13A5基因的815 bp的扩增产物被Bsu36 I酶切为251 bp和564 bp两种长度的片段，也就是有3条带：815 bp、 564 bp、251 bp，则为TC基因型，若为2条带：564 bp、251 bp，则为CC基因型，若为1条带：815 bp，则为TT基因型。
2.2 基因和基因型频率
PCR-RFLP-Bsu36 I 多态性在各品种中的分布情况如表1所示，由表1可知，在宁乡豬和大白猪中，皆存在三种基因型。其中，在宁乡猪中主要是CC基因型，C基因频率为0.876 9：在大白猪中，CC基因型相对较少，C基因频率为0.293 9。
SLC13A5基因251 bp处T→C变异位点的基因遗传多态性如表2所示，由表2可知，从多态信息含量上看，大白猪具有遗传多态性，并且具有较高的遗传变异，而宁乡猪低于0.25，结果表现为低度多态。
3 讨论与结论
在宁乡猪中，C基因为优势等位基因，基因频率为0.876 9，在大白猪中，T基因为优势等位基因，基因频率为0.706 1。大白猪具有遗传多态性，并且具有较高的遗传变异，而宁乡猪为低度多态。
从本实验可以知道，在宁乡猪中，存在SLC13A5基因的三种基因型：TT、TC、CC，其中，CC基因型频率远高于其他两种基因型频率。再结合宁乡猪的肉质性状数据，就可以分析各基因型频率和肉质性状的相关关系，为SLC13A5基因在宁乡猪的品种选育发挥作用打下基础。□□
参考文献：（4篇，略）
基金资助：宁乡猪基础研究（5026401-0315069）.
作者简介：苏建（1990- ），男，汉族，湖南常德人，硕士在读，研究方向为猪分子遗传育种；E-mail：724809624@qq.com。
通信作者：马海明，博士，教授，研究方向动物遗传育种；E-mail：mahai ming2000@163.com。
摘 要：为探究宁乡猪肉质性状相关基因SLC13A5多态性，利用PCR—RFLP技术检测SLC13A5基因。结果表明，第251 bp处有一个T/C的碱基突变，导致PCR—RFLP—Bsu36 I多态性。在宁乡猪中，CC基因型频率为0.830 8，C基因频率为0.876 9；在大白猪中，TT基因型频率为0.484 8，T基因频率为0.706 9。本研究为对宁乡猪肉质性状相关基因SLC13A5的进一步研究打下了基础。
关键词：宁乡猪；SLC13A5基因；肉质性状
中图分类号：S813.3 文献标识码：A 文章编号：1001-0769（2017）04-0053-02
宁乡猪是湖南宁乡的地方猪种，也是我国四大名猪（荣昌猪、太湖猪、金华猪、宁乡猪）之一。相对于其他猪种，它有着矮短圆肥、结构疏松、清秀细致、背腰平直、腹大下垂拖地、臀部斜尻、四肢粗短、前肢挺直、后肢弯曲等特点[1]。另外，宁乡猪因早熟易肥、蓄脂力强、肉质细嫩、肉味鲜美[2]、肌肉中夹有较多脂肪、仔猪烤制皮不开裂等特点而享誉中外[3]。
有研究发现SLC13A5基因能够对小鼠的干细胞ATP/ADP比值进行调节，通过依次调节肝脏AMP激活蛋白激酶（AMPK）信号通道、诱导过氧化酶体增殖物激活受体γ共激活因子-1α（PGC-1α）、调节乙酰辅酶A羧化酶-2（ACC-2）和固醇调节元件结合蛋白（SREBP-1c）的含量，从而调节肝脏线粒体的生物合成作用，最终对脂质氧化、能量消耗和肝脏脂质的从头合成进行调节。
另外，有研究发现，猪的SLC13A5基因与肌内脂肪含量有显著的关系。本实验对SLC13A5基因的多态性研究，是为了筛选可用于标记宁乡猪肉质性状的遗传标记。
1材料与方法
1.1 样本采集
宁乡猪耳样总共65头来源于宁乡大龙畜牧科技有限公司，大白猪耳样总共330头来源于正虹科技股份有限公司。
1.2 基因组DNA提取
基因组DNA的提取按照常规酚-氯仿萃取的方法进行[4]。
1.3 引物的合成
引物的合成以及聚合酶链式反应（Polymerase Chain Reaction，PCR）扩增检测SLC13A5基因多态性的引物设计为：
正向引物：5’-CTCATTCCTGCGTCTTATTC-3’；
反向引物为5’-GCTGTGGGTGGTGTCATT-3’。
PCR条件：PCR反应体系（总体积 20 μL）：10×Buffer 2 μL，2 mmol/L dNTPs 1.6μL，20 mmol/L MgCl2 1.6 μL，Taq DNA聚合酶（5 U/μL）0.4 μL，DNA模板（100 ng/μL）1 μL，上下游引物（10 pmol/μL）各0.4 μL，ddH2O 12.6 μL。
反应程序：94 ℃预变性5 min；94 ℃变性30 s，60 ℃退火30 s，72 ℃延伸50 s，共35个循环；72℃后延伸8 min，最后 4 ℃保存。
1.4 PCR-RFLP检测
在10 μL PCR产物（815 bp）中加入0.8 μL 10×内切酶缓冲液、0.2 μL限制性内切酶Bsu36 I和1 μL双蒸水，总体积为12 μL，37 ℃消化4 h～10 h。用2 %琼脂糖凝胶电泳酶切产物，并对基因分型。
2结果与分析
2.1 SLC13A5基因的扩增产物的酶切
若SLC13A5基因的815 bp的扩增产物被Bsu36 I酶切为251 bp和564 bp两种长度的片段，也就是有3条带：815 bp、 564 bp、251 bp，则为TC基因型，若为2条带：564 bp、251 bp，则为CC基因型，若为1条带：815 bp，则为TT基因型。
2.2 基因和基因型频率
PCR-RFLP-Bsu36 I 多态性在各品种中的分布情况如表1所示，由表1可知，在宁乡豬和大白猪中，皆存在三种基因型。其中，在宁乡猪中主要是CC基因型，C基因频率为0.876 9：在大白猪中，CC基因型相对较少，C基因频率为0.293 9。
SLC13A5基因251 bp处T→C变异位点的基因遗传多态性如表2所示，由表2可知，从多态信息含量上看，大白猪具有遗传多态性，并且具有较高的遗传变异，而宁乡猪低于0.25，结果表现为低度多态。
3 讨论与结论
在宁乡猪中，C基因为优势等位基因，基因频率为0.876 9，在大白猪中，T基因为优势等位基因，基因频率为0.706 1。大白猪具有遗传多态性，并且具有较高的遗传变异，而宁乡猪为低度多态。
从本实验可以知道，在宁乡猪中，存在SLC13A5基因的三种基因型：TT、TC、CC，其中，CC基因型频率远高于其他两种基因型频率。再结合宁乡猪的肉质性状数据，就可以分析各基因型频率和肉质性状的相关关系，为SLC13A5基因在宁乡猪的品种选育发挥作用打下基础。□□
参考文献：（4篇，略）
基金资助：宁乡猪基础研究（5026401-0315069）.
作者简介：苏建（1990- ），男，汉族，湖南常德人，硕士在读，研究方向为猪分子遗传育种；E-mail：724809624@qq.com。
通信作者：马海明，博士，教授，研究方向动物遗传育种；E-mail：mahai ming2000@163.com。