【摘 要】
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目的 探讨烟酰胺磷酸核糖转移酶(NAMPT)基因的表达对转化生长因子β1(TGF-β1)诱导的人胚肺成纤维细胞系MRC-5细胞自噬功能的影响.方法 基于基因表达综合数据库和人类自噬基因数据库,运用R软件筛选出GSE53845、GSE10667数据集中差异表达的自噬相关基因NAMPT.选择2018年1月至2020年3月于成都医学院第一附属医院就诊的50例经纤维支气管镜冷冻肺活检确诊的特发性肺纤维化(IPF)患者的病变肺组织标本作为IPF组,选择同期50例经外科手术治疗的早期肺腺癌患者的正常肺组织样本作为对照
【机 构】
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成都医学院临床医学院成都医学院第一附属医院呼吸与危重症医学科,成都610500
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目的 探讨烟酰胺磷酸核糖转移酶(NAMPT)基因的表达对转化生长因子β1(TGF-β1)诱导的人胚肺成纤维细胞系MRC-5细胞自噬功能的影响.方法 基于基因表达综合数据库和人类自噬基因数据库,运用R软件筛选出GSE53845、GSE10667数据集中差异表达的自噬相关基因NAMPT.选择2018年1月至2020年3月于成都医学院第一附属医院就诊的50例经纤维支气管镜冷冻肺活检确诊的特发性肺纤维化(IPF)患者的病变肺组织标本作为IPF组,选择同期50例经外科手术治疗的早期肺腺癌患者的正常肺组织样本作为对照组,验证组间NAMPT的表达差异.将人胚肺成纤维细胞系MRC-5细胞分为空白对照组、TGF-β1组、阴性对照组以及运用小干扰RNA敲减的NAMPT (si-NAMPT)组,应用蛋白质印迹法检测各组自噬相关蛋白表达,噻唑蓝比色法检测各组细胞活力,并应用单丹磺酰尸胺(MDC)染色对转染后细胞自噬体进行测定.结果 IPF肺组织中NAMPTmRNA的相对表达量高于正常肺组织[(3.7±2.3)比(1.4±0.7)],差异有统计学意义(t=6.804,P=0.001).TGF-β1组MRC-5细胞NAMPT蛋白表达量明显高于空白对照组和si-NAMPT组[(1.178±0.087)比(0.461±0.070)、(0.564 ±0.066)](均P＜0.05),与阴性对照组比较差异无统计学意义(P＞0.05).TGF-β1组自噬相关蛋白表达水平明显低于空白对照组,si-NAMPT组明显高于TGF-β1组,差异均有统计学意义(均P＜0.05).TGF-β1组MRC-5细胞活力明显高于空白对照组和si-NAMPT组[(1.69±0.18)比(0.66 ±0.04)、(0.94±0.06)](均P＜0.05).MDC染色结果显示TGF-β1组MRC-5细胞内自噬体荧光斑点基本消失,si-NAMPT组细胞内见大量自噬体荧光斑点.结论 IPF组织中NAMPT呈现高表达,敲减NAMPT基因可以促进TGF-β1诱导的MRC-5细胞的自噬功能并抑制细胞生长.
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