【摘 要】
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目的 观察槲皮素对人肝癌细胞HepG2中热休克蛋白(HSP)表达的影响,为其抗肿瘤活性探寻可能的靶点.方法 经过连续传代,充分氘化HepG2细胞中的亮氨酸,并鉴定其标记率.采用四甲基
【机 构】
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四川省肿瘤医院肿瘤内科,成都医学院第一附属医院消化内科,四川大学华西医院肿瘤中心
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目的 观察槲皮素对人肝癌细胞HepG2中热休克蛋白(HSP)表达的影响,为其抗肿瘤活性探寻可能的靶点.方法 经过连续传代,充分氘化HepG2细胞中的亮氨酸,并鉴定其标记率.采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测槲皮素对HepG2细胞生长的抑制活性及有效浓度.以50 μmol/L槲皮素作用氘化HepG2细胞48 h后,与正常HepG2细胞按1:1等量混合电泳,提肽后进行质谱鉴定,将获得的肽片段数据进行Mascot检索.设定严格的可信区间,得出槲皮素作用前后HSP的定量信息.采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)验证槲皮素作用前后HepG2细胞中HSP90和HSP70的表达差异.结果 连续传代10次以上,HepG2细胞中氘化亮氨酸已达95％以上.MT法检测结果表明,槲皮素对HepG2细胞的IC50接近50 μmol/L,且随着时间和浓度的增加,其对HepG2细胞的生长抑制作用更加明显.细胞培养氨基酸稳定同位素标记-质谱技术(SILAC-MS)获得了槲皮素作用前后HepG2细胞中HSP90、HSP70、HSP60和HSP20的定量信息.相对正常HepG2细胞而言,所有鉴定的HSP在50 μmol/L槲皮素作用48h后均有较大程度的表达下调,其中HSP90表达下调至正常HepG2细胞的49.3％,HSP70表达下调至正常HepG2细胞的43.6％.RT-PCR的检测结果支持SILAC-MS的鉴定结果.结论 SILAC-MS成熟可靠,能全面定量分析外因作用前后HepG2细胞中全系列蛋白谱的变化.槲皮素对HepG2细胞中HSP表现出强烈的抑制能力,并且这种作用可能是其发挥抗肿瘤活性的途径之一.
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