猪肺炎支原体乳酸脱氢酶基因的克隆、表达、纯化及其间接ELISA检测方法的建立

来源 :中国兽医学报 | 被引量 : 0次 | 上传用户:chc1102
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根据GenBank中的猪肺炎支原体乳酸脱氢酶(LDH)基因序列设计1对引物,PCR扩增LDH基因,首先将扩增片段连接到克隆载体pMD18-T上,然后连接到表达载体pGEX—KG上,经测序正确后诱导表达。重组质粒在大肠杆菌中表达的目的蛋白以可溶性蛋白和包涵体2种形式存在。将超声波破碎的诱导菌液高速离心,其上清用Glutathione Sepharose4Bbead亲和层析纯化。用猪肺炎支原体的标准阳性血清对纯化蛋白作Western—blot检测,出现目的条带;以纯化蛋白为抗原建立了检测猪肺炎支原体抗体的间接
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