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以TMV复制酶基因作为RNAi的靶向序列，应用RT—PCR法获得目的DNA序列。依据RNAi机制，以酶切后连接的方法将目的DNA序列正向、反向锚定连接到pUCCRNAi载体质粒，构建含目的序列反向重复结构的RNA干涉中间载体；反向重复结构酶切后插入含超强启动子的pC2300—35s—OCS表达载体，重组的表达载体质粒经冻融法转化到只含辅助质粒的根癌农杆菌中，完成双元载体系统的构建。每步的重组子经特异引物PCR验证和酶切验证有相应的特异条带存在，且测序鉴定序列正确。确认成功构建了TMV复制酶基因靶向的RNA