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摘要 [目的]研究细叶石仙桃石油醚部位的抗氧化能力，探讨其抗氧化活性和总酚含量之间的关系。[方法]采用冷浸法得到细叶石仙桃石油醚部位，以没食子酸为标准品测定其总酚含量，并采用ABTS体系和还原能力体系研究其抗氧化效果。[结果]细叶石仙桃石油醚部位对ABTS自由基清除能力与作用时间有关，还原能力与提取物浓度呈正相关。[结论]细叶石仙桃石油醚部位具有较好的抗氧化性能。
关键词 细叶石仙桃;ABTS;还原能力;抗氧化;总酚含量
中图分类号R284文献标识码A文章编号0517-6611（2018）36-0166-02
抗氧化剂可以防止和延缓食品以及生物系统中自由基和活性氧（ROS）引起的氧化过程。ROS与许多疾病的病因有关，包括炎症疾病、癌症、糖尿病和衰老[1-3]。为了减少活性氧的氧化损伤，目前广泛使用的合成抗氧化剂有丁基羟基茴香醚、丁基羟基甲苯、叔丁基对苯二酚和没食子酸丙酯等。然而，由于副作用多且有致癌风险，它们的应用受到限制。因此，通过天然和安全的抗氧化剂增强机体的抗氧化防御能力，成为降低氧化应激水平并延缓许多慢性疾病发展的方法[4-8]。该试验通过冷浸法得到细叶石仙桃石油醚部位，以没食子酸为标准品测定其总酚含量，采用ABTS体系和还原能力体系，来评估其抗氧化能力，寻找新的天然抗氧化剂。
1材料与方法
1.1试材与仪器
UV1901型紫外可见分光光度计（北京普析电子科技有限公司）。药材购于广西百色，经鉴定为兰科石仙桃属植物细叶石仙桃。芦丁标准品购于百灵威试剂公司（北京）。所有试剂均为分析纯。
1.2方法
1.2.1细叶石仙桃石油醚部位制备。
称取20 g细叶石仙桃粉末，加入200 mL乙醇（95%），冷浸72 h。重复上述操作3次，合并提取液。旋转蒸发回收溶剂，得到细叶石仙桃石油醚部位。
1.2.2ABTS·+自由基清除能力测定。
将2，2’-联氨-双
1.2.3还原能力测定[5]。
取细叶石仙桃石油醚部位溶液，加入2.5 mL PBS溶液（pH=7.4）、2.5 mL KFe（CN）4（1%）。上述混合物于50 ℃恒温20 min后，加入2.5 mL三氯乙酸溶液（10%），离心10 min。取上清液2.5 mL，加入2.5 mL蒸馏水、0.5 mL FeCl3（1%），混匀。在700 nm处测定吸光度，以蒸馏水为参比。
1.2.4总酚含量测定。
1.2.4.1Folin-ciocalteu试剂的配制。称取80 g钨酸钠和20 g钼酸钠于圆底烧瓶中，用560 mL蒸馏水溶解，加入40 mL 磷酸溶液（85%）和80 mL浓盐酸，文火回流10 h，然后加入12 g硫酸锂及60 mL双氧水，加热沸腾15 min至溶液呈亮黄色。冷却，移入1 000 mL容量瓶中，用蒸馏水定容，贮于棕色瓶中。
1.2.4.2总酚标准曲线绘制。精确称取没食子酸标准品
1.2.4.3提取液中总酚含量的测定。将各提取物溶液测定吸光度，多次测量求平均值。根据回归方程计算总酚的没食子酸当量，总酚含量以1 g干物质的没食子酸当量
2结果与分析
2.1细叶石仙桃石油醚部位对ABTS自由基的清除能力
2.1.1不同浓度提取物对ABTS自由基的清除能力。
考察细叶石仙桃石油醚部位对ABTS自由基的清除能力与药液浓度之间的关系（图1）发现，细叶石仙桃石油醚部位在较低浓度即表现出较好的ABTS自由基的清除能力，在药液浓度为0.2 mg/mL时，清除率为21.7%。此外，细叶石仙桃石油醚部位的ABTS自由基的清除能力与药液浓度关系不大，在药液浓度为0.8 mg/mL时，清除率为25.1%;在药液浓度为
2.1.2不同时间下提取物对ABTS自由基的清除能力。
考察细叶石仙桃石油醚部位对ABTS自由基的清除率与作用时间的关系（图2）发现，反应时间为1 min时，细叶石仙桃石油醚部位对ABTS自由基的清除率为17.3%。随着作用时间增加，细叶石仙桃石油醚部位对ABTS自由基的清除率增加。反应时间为3和5 min时，细叶石仙桃石油醚部位对ABTS自由基的清除率分别增加了14.5%和22.0%。细叶石仙桃石油醚部位对ABTS自由基的清除率从大到小的顺序依次为反应时间10、5、3、1 min。
2.2细叶石仙桃石油醚部位的还原能力
考察细叶石仙桃石油醚部位的还原能力與药液浓度之间的关系（图3）发现，随着药液浓度增大，细叶石仙桃石油醚部位测得的吸光度迅速增大。药液浓度为0.2 mg/mL时，吸光度为0.07;药液浓度为0.5和0.8 mg/mL时，吸光度增加为药液浓度为0.2 mg/mL时吸光度的1.45和1.82倍;药液浓度为2.0 mg/mL时，吸光度为药液浓度为0.2 mg/mL时吸光度的2.29倍。
2.3细叶石仙桃石油醚部位的总酚含量测定结果
采用没食子酸标准品来测定细叶石仙桃石油醚部位的总酚含量，细叶石仙桃石油醚部位的总酚含量为8.7 mg/g。结果表明，细叶石仙桃石油醚部位所具有的ABTS·+自由基的清除能力和还原能力可能与其所含酚类物质有关。酚类化合物作为次生植物代谢物，已被证明能防御内源性ROS和自由基的氧化应激。酚类化合物具有抗氧化、抗增殖、抗菌、抗炎、抗过敏等多种生物学特性。
3结论
该试验通过冷浸法得到细叶石仙桃石油醚部位，以没食子酸为标准品测定其总酚含量，并采用ABTS和还原能力体系来评估其抗氧化能力，探索细叶石仙桃石油醚部位总酚含量和其抗氧化能力之间的关系。结果表明，细叶石仙桃石油醚部位在较低浓度即表现出较好的ABTS自由基的清除能力，清除能力与药液浓度关系不大，与作用时间有关。细叶石仙桃石油醚部位的还原能力与药液浓度相关，随着药液浓度增大，细叶石仙桃石油醚部位的还原能力迅速增大。细叶石仙桃石油醚部位表现出较好的抗氧化作用。
参考文献
[1] BRANEN A L.Toxicology and biochemistry of butylated hydroxyl anisole and butylated hydroxytoluene[J].J Am Oil Chem Soc，1975，52：59-63.
[2] 蔡亚玲，阮金兰.枫叶化学成分的研究[J].中药材，2005，28（4）：294-295.
[3] DEWANTO V，WU X Z，ADOM K K，et al.Thermal processing enhances the nutritional value of tomatoes by increasing total antioxidant activity[J].J Agric Food Chem，2002，50（10）：3010-3014.
[4] LI P Y，HUO L N，SU W，et al.Free radicalscavenging capacity，antioxidant activity and phenolic content of Pouzolzia zeylanica[J].J Serb Chem Soc，2011，76（5）：709-711.
[5] MAZOR D，GREENBERG L，SHAMIR D，et al.Antioxidant properties of bucillamine：Possible mode of action [J].Biochem Bioph Res Co，2006，349（3）：1171-1175.
[6] 李培源，苏炜，霍丽妮，等.黄葵籽挥发油化学成分及其抗氧化活性研究[J].时珍国医国药，2012，23（3）：603-604.
[7] 李培源，卢汝梅，苏炜，等.地肤子总黄酮含量测定及其抗氧化活性[J].湖北农业科学，2016，55（7）：1802-1804.
[8] 李培源，卢汝梅，苏炜，等.萆薢总黄酮含量测定及其抗氧化活性研究[J].时珍国医国药，2015，26（6）：1303-1304.
关键词 细叶石仙桃;ABTS;还原能力;抗氧化;总酚含量
中图分类号R284文献标识码A文章编号0517-6611（2018）36-0166-02
抗氧化剂可以防止和延缓食品以及生物系统中自由基和活性氧（ROS）引起的氧化过程。ROS与许多疾病的病因有关，包括炎症疾病、癌症、糖尿病和衰老[1-3]。为了减少活性氧的氧化损伤，目前广泛使用的合成抗氧化剂有丁基羟基茴香醚、丁基羟基甲苯、叔丁基对苯二酚和没食子酸丙酯等。然而，由于副作用多且有致癌风险，它们的应用受到限制。因此，通过天然和安全的抗氧化剂增强机体的抗氧化防御能力，成为降低氧化应激水平并延缓许多慢性疾病发展的方法[4-8]。该试验通过冷浸法得到细叶石仙桃石油醚部位，以没食子酸为标准品测定其总酚含量，采用ABTS体系和还原能力体系，来评估其抗氧化能力，寻找新的天然抗氧化剂。
1材料与方法
1.1试材与仪器
UV1901型紫外可见分光光度计（北京普析电子科技有限公司）。药材购于广西百色，经鉴定为兰科石仙桃属植物细叶石仙桃。芦丁标准品购于百灵威试剂公司（北京）。所有试剂均为分析纯。
1.2方法
1.2.1细叶石仙桃石油醚部位制备。
称取20 g细叶石仙桃粉末，加入200 mL乙醇（95%），冷浸72 h。重复上述操作3次，合并提取液。旋转蒸发回收溶剂，得到细叶石仙桃石油醚部位。
1.2.2ABTS·+自由基清除能力测定。
将2，2’-联氨-双
1.2.3还原能力测定[5]。
取细叶石仙桃石油醚部位溶液，加入2.5 mL PBS溶液（pH=7.4）、2.5 mL KFe（CN）4（1%）。上述混合物于50 ℃恒温20 min后，加入2.5 mL三氯乙酸溶液（10%），离心10 min。取上清液2.5 mL，加入2.5 mL蒸馏水、0.5 mL FeCl3（1%），混匀。在700 nm处测定吸光度，以蒸馏水为参比。
1.2.4总酚含量测定。
1.2.4.1Folin-ciocalteu试剂的配制。称取80 g钨酸钠和20 g钼酸钠于圆底烧瓶中，用560 mL蒸馏水溶解，加入40 mL 磷酸溶液（85%）和80 mL浓盐酸，文火回流10 h，然后加入12 g硫酸锂及60 mL双氧水，加热沸腾15 min至溶液呈亮黄色。冷却，移入1 000 mL容量瓶中，用蒸馏水定容，贮于棕色瓶中。
1.2.4.2总酚标准曲线绘制。精确称取没食子酸标准品
1.2.4.3提取液中总酚含量的测定。将各提取物溶液测定吸光度，多次测量求平均值。根据回归方程计算总酚的没食子酸当量，总酚含量以1 g干物质的没食子酸当量
2结果与分析
2.1细叶石仙桃石油醚部位对ABTS自由基的清除能力
2.1.1不同浓度提取物对ABTS自由基的清除能力。
考察细叶石仙桃石油醚部位对ABTS自由基的清除能力与药液浓度之间的关系（图1）发现，细叶石仙桃石油醚部位在较低浓度即表现出较好的ABTS自由基的清除能力，在药液浓度为0.2 mg/mL时，清除率为21.7%。此外，细叶石仙桃石油醚部位的ABTS自由基的清除能力与药液浓度关系不大，在药液浓度为0.8 mg/mL时，清除率为25.1%;在药液浓度为
2.1.2不同时间下提取物对ABTS自由基的清除能力。
考察细叶石仙桃石油醚部位对ABTS自由基的清除率与作用时间的关系（图2）发现，反应时间为1 min时，细叶石仙桃石油醚部位对ABTS自由基的清除率为17.3%。随着作用时间增加，细叶石仙桃石油醚部位对ABTS自由基的清除率增加。反应时间为3和5 min时，细叶石仙桃石油醚部位对ABTS自由基的清除率分别增加了14.5%和22.0%。细叶石仙桃石油醚部位对ABTS自由基的清除率从大到小的顺序依次为反应时间10、5、3、1 min。
2.2细叶石仙桃石油醚部位的还原能力
考察细叶石仙桃石油醚部位的还原能力與药液浓度之间的关系（图3）发现，随着药液浓度增大，细叶石仙桃石油醚部位测得的吸光度迅速增大。药液浓度为0.2 mg/mL时，吸光度为0.07;药液浓度为0.5和0.8 mg/mL时，吸光度增加为药液浓度为0.2 mg/mL时吸光度的1.45和1.82倍;药液浓度为2.0 mg/mL时，吸光度为药液浓度为0.2 mg/mL时吸光度的2.29倍。
2.3细叶石仙桃石油醚部位的总酚含量测定结果
采用没食子酸标准品来测定细叶石仙桃石油醚部位的总酚含量，细叶石仙桃石油醚部位的总酚含量为8.7 mg/g。结果表明，细叶石仙桃石油醚部位所具有的ABTS·+自由基的清除能力和还原能力可能与其所含酚类物质有关。酚类化合物作为次生植物代谢物，已被证明能防御内源性ROS和自由基的氧化应激。酚类化合物具有抗氧化、抗增殖、抗菌、抗炎、抗过敏等多种生物学特性。
3结论
该试验通过冷浸法得到细叶石仙桃石油醚部位，以没食子酸为标准品测定其总酚含量，并采用ABTS和还原能力体系来评估其抗氧化能力，探索细叶石仙桃石油醚部位总酚含量和其抗氧化能力之间的关系。结果表明，细叶石仙桃石油醚部位在较低浓度即表现出较好的ABTS自由基的清除能力，清除能力与药液浓度关系不大，与作用时间有关。细叶石仙桃石油醚部位的还原能力与药液浓度相关，随着药液浓度增大，细叶石仙桃石油醚部位的还原能力迅速增大。细叶石仙桃石油醚部位表现出较好的抗氧化作用。
参考文献
[1] BRANEN A L.Toxicology and biochemistry of butylated hydroxyl anisole and butylated hydroxytoluene[J].J Am Oil Chem Soc，1975，52：59-63.
[2] 蔡亚玲，阮金兰.枫叶化学成分的研究[J].中药材，2005，28（4）：294-295.
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[4] LI P Y，HUO L N，SU W，et al.Free radicalscavenging capacity，antioxidant activity and phenolic content of Pouzolzia zeylanica[J].J Serb Chem Soc，2011，76（5）：709-711.
[5] MAZOR D，GREENBERG L，SHAMIR D，et al.Antioxidant properties of bucillamine：Possible mode of action [J].Biochem Bioph Res Co，2006，349（3）：1171-1175.
[6] 李培源，苏炜，霍丽妮，等.黄葵籽挥发油化学成分及其抗氧化活性研究[J].时珍国医国药，2012，23（3）：603-604.
[7] 李培源，卢汝梅，苏炜，等.地肤子总黄酮含量测定及其抗氧化活性[J].湖北农业科学，2016，55（7）：1802-1804.
[8] 李培源，卢汝梅，苏炜，等.萆薢总黄酮含量测定及其抗氧化活性研究[J].时珍国医国药，2015，26（6）：1303-1304.