自噬是真核细胞清除胞内冗余物质的降解机制，也是细胞针对病原体入侵的一种天然免疫机制。自噬相关基因3(Autophagy-related gene 3,Atg3)在细胞自噬发生过程中起决定性作用。为研究Atg3对埃博拉病毒(Ebola virus,EBOV)组装的影响，本研究首先根据CRISPR/Cas9技术构建了携带有Atg3基因靶向向导RNA(guide RNA,gRNA)、表达Cas9的重组质粒pSpCas-Atg3，将此质粒转染至人胚胎肾细胞293T中，之后采用流式分选结合有限稀释法筛选单细胞克隆。细胞基因测序及Western Blot试验表明成功获得了Atg3基因敲除的细胞系。在Agt3基因敲除细胞系和野生型细胞中分别共同转染表达EBOV囊膜蛋白(Glycoprotein,GP)和基质蛋白的重组质粒，包装病毒样颗粒(Virus-like particles,VLP)；同时在两种细胞中组装整合有EBOV的重组HIV假病毒，获得的假病毒感染非洲绿猴肾细胞(Vero细胞)，通过测定报告基因的活性判定病毒对细胞的侵入能力。结果显示Atg3基因缺失后，VLP所整合的GP蛋白显著增多，假病毒对细胞的侵染能力也明显增强(P<0.001)，表明Agt3能够负调控EBOV的组装和入侵。本研究为开发新抗病毒药物提供了新思路。