抗人AFP单链抗体基因的构建和在大肠杆菌中的表达

来源 :四川大学学报(医学版) | 被引量 : 0次 | 上传用户：zhxg

【摘要】

：

目的构建抗人AFP 单链抗体(ScFv)的基因并转入大肠杆菌BL-21(DE3)中诱导表达.分离纯化ScFv并鉴定其生物活性.方法用RT-PCR方法从能分泌特异性抗人AFP单克隆抗体的杂交瘤细胞

【作者】

：

张平蔡美英赵宗蓉魏大鹏黎光毕建虹

【机构】

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四川大学华西基础医学与法医学院

【出处】

：

四川大学学报(医学版)

【发表日期】

：

2005年1期

【关键词】

：

ScFv基因构建和表达 ScFv活性 ScFv geneConstruction and expressionScFV activation

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目的构建抗人AFP 单链抗体(ScFv)的基因并转入大肠杆菌BL-21(DE3)中诱导表达.分离纯化ScFv并鉴定其生物活性.方法用RT-PCR方法从能分泌特异性抗人AFP单克隆抗体的杂交瘤细胞中分离纯化抗体VH和VL基因.用重叠延伸PCR方法将VH和VL拼接在一起,构建抗人AFP单链抗体的基因.将ScFv基因克隆至pGEM-T载体构建,用限制性内切酶切以及测序鉴定.将ScFv基因连接到pET32 (a+)质粒,转化BL-21(DE3)细菌.抗性生长的克隆用异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导4

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