小鼠甲胎蛋白基因的克隆表达鉴定及稳定表达甲胎蛋白的小鼠肿瘤细胞株的建立

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目的:克隆小鼠甲胎蛋白(AFP)基因并进行表达鉴定,构建小鼠AFP真核表达载体并建立稳定表达甲胎蛋白的小鼠肿瘤细胞株.方法:从HePal-6细胞中提取总RNA进行RT—PCR,克隆出小鼠AFP基因,亚克隆于pcDNA3.1中构建真核表达载体6pmAFP,进行酶切、测序和表达鉴定,pmAFP稳定转染EL-4细胞建立EL-4(mAFP)细胞株,RT-PCR检测EL-4(mAFP)细胞mAFP mRNA的表达,Western blot检测mAFP蛋白表达,将EL-4(mAFP)细胞种植于6只小鼠背部皮下观察成瘤
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