【摘 要】
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为构建含较多大片段的高质量的老年性白内障消减cDNA文库,利用生物素标记、磁珠分离的改良消减杂交法获得差异cDNA.利用选择性PCR法扩增其中大片段差异cDNA,将其与T-载体进行
【机 构】
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第四军医大学西京医院眼科,第四军医大学生物化学与分子生物学教研室,第四军医大学科研处
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为构建含较多大片段的高质量的老年性白内障消减cDNA文库,利用生物素标记、磁珠分离的改良消减杂交法获得差异cDNA.利用选择性PCR法扩增其中大片段差异cDNA,将其与T-载体进行T/A连接并转化入大肠杆菌,成功构建老年性白内障消减cDNA文库.共获得4 000余个克隆,随机挑取的22个克隆中,≥1 000 bp的片段有7个,占31.8%,≥750 bp有15个,占68.2%.将≥750 bp的15个克隆进行反向点杂交,排除其中假阳性克隆,阳性克隆经测序并与GenBank比较,得到6个已知基因、1个新基因
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