人子宫内膜癌血管内皮细胞的分离鉴定及生物学特性检测

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目的建立人子宫内膜癌血管内皮细胞分离纯化及体外培养方法,观察所分离的人子宫内膜癌血管内皮细胞的生物学特性。方法采用优化的CD31单克隆抗体交联免疫磁珠法,对子宫内膜癌组织和正常子宫内膜组织标本进行血管内皮细胞分选、鉴定、纯度检测及体外培养。应用四甲基偶氮唑蓝(MTY)法、划痕实验、Transwell侵袭小室模型、Matrigel胶体外管腔形成实验,比较人子宫内膜癌血管内皮细胞和正常子宫内膜血管内皮细胞的增殖、迁移、侵袭和管腔形成能力。结果分选获得的两种血管内皮细胞纯度均〉95%,体外培养呈现典型的内皮细胞形态特征,表面均表达特异性标志物CD31和vW因子。MTT法检测结果显示,人子宫内膜癌血管内皮细胞和正常子宫内膜血管内皮细胞的增殖水平差异无统计学意义(P=0.173)。人子宫内膜癌血管内皮细胞和正常子宫内膜血管内皮细胞的划痕修复面积百分比分别为(37.54±5.63)%和(16.37±2.88)%,穿膜细胞数分别为(189±31)个/高倍视野和(131±22)个/高倍视野,形成的血管管腔样结构分别为(62±16)个和(35±11)个。与正常子宫内膜血管内皮细胞比较,人子宫内膜癌血管内皮细胞的划痕修复面积明显增加(P=0.006),穿膜细胞数显著增多(P=0.033),形成的血管管腔样结构明显增加(P=0.029)。结论采用优化的免疫磁珠分选法可高纯度地分离纯化出子宫内膜癌和正常子宫内膜组织中的血管内皮细胞。与正常子宫内膜血管内皮细胞比较,人子宫内膜癌血管内皮细胞的迁移、侵袭和血管生成能力明显增强。

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